徐佳 陈魁敏 陈冬梅 徐静 海晓欧 周园 肖纯凌▲
沈阳医学院病原生物学教研室辽宁省环境污染与微生物重点实验室，辽宁沈阳110034

[摘要]目的了解健康成年人上呼吸道菌群多样性及优势菌群构成，为从微生态角度预防以口咽部为门户的呼吸道感染提供科学依据。方法随机选取2012年4～6月60名沈阳市区30～50岁健康成人作为研究对象，使用无菌咽拭子采集标本，对菌群进行定量分析、定性鉴定。结果60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁的需氧菌群与厌氧菌群之比为2.51∶1；检出率较高的需氧菌及厌氧菌包括缓症链球菌、口腔链球菌、唾液链球菌、干燥奈瑟球菌、灰色奈瑟球菌及麻疹孪生球菌、普氏厌氧球菌、韦荣球菌、丙酸丙酸杆菌等，检出率较高的菌，其菌株构成比也较高。结论沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁检出率和构成比都较高的需氧菌和厌氧菌共同构成上呼吸道口咽部优势菌群，在维持呼吸系统微生态固有平衡中起重要作用，进一步阐明其生态学意义，能够为呼吸道益生菌的备选菌株应用于呼吸道活菌制剂的开发研究提供理论依据。

[关键词]呼吸道；需氧菌；厌氧菌；微生态；成人

呼吸道是与外界相通的开放性腔道，受环境的影响较大。在健康人的咽部寄居着一定种类和数量的正常微生物群，即呼吸道正常菌群。在外界因素影响下，这些正常菌群不断演替以维持呼吸系统微生态的动态平衡[1]。在环境污染、抗生素滥用等因素的影响下，正常菌群中的某些菌株会转变为条件致病菌[2]。由于呼吸道菌群定性与定量上的稳定性受外环境的影响较大，因此给临床呼吸道感染的治疗增加了很多难度，这使得从微生态学角度预防和治疗呼吸道感染势在必行。通过适时、适当、适量补充呼吸道正常生理性菌群来维持呼吸道微生态的协调平衡，利用原籍菌群的生理性拮抗作用，抑制致病菌的生长，从而达到预防和治疗呼吸道感染的目的。目前，已有应用益生菌预防儿童抗生素相关性腹泻的报道[3]，但应用益生菌预防和治疗呼吸道感染的相关报道尚少。本研究随机选取60名沈阳市区30～50岁健康成人作为研究对象，对呼吸道正常菌群中的可培养菌进行定量定性研究，现将结果报道如下。

1.1 一般资料

随机选取2012年4～6月沈阳市区30～50岁健康成人60名，男女各30名。实验对象要求身体健康，正常饮食，无吸烟史，无呼吸系统疾病，无特殊气体及粉尘等接触史，近1个月无抗生素服用史，无其他急慢性疾病[4]。

1.2 方法

1.2.1 标本采集采样前2 h禁食，用无菌咽拭子在实验对象的咽后壁取材[5]，立即置入含1 ml无菌生理盐水的离心管中，振荡混匀。采集时勿触及口腔咽颊及舌黏膜。

1.2.2 分离培养将标本稀释10、100倍，分别将100 μl不同稀释倍数的标本用无菌L棒均匀涂布于血平板、厌氧血平板、巧克力平板、麦康凯平板和沙保弱平板。需氧血平板37℃需氧培养18～24 h，厌氧血平板37℃厌氧培养48～72 h，巧克力平板置于37℃5%CO2培养箱培养18～24 h，沙保弱平板30℃需氧培养1周，记录每种平板上的菌落种类和数量[6]。

1.2.3 菌株纯化及革兰染色分别挑取上述分离培养结果中的单个菌落进行传代培养，培养后进行革兰染色，记录每种菌株的特征。

1.2.4 生化鉴定根据革兰染色结果选择相应的生化鉴定试剂条（法国梅里埃生物公司），按说明书操作，制备相应浓度的菌悬液，加样、培养，上机检测，鉴定菌种名称[7]。

1.3 统计学处理

采用描述法对数据进行分析。

2.1 定量测定结果统计

60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁菌群中需氧菌为9.88×1011菌落形成单位（cfu）/ml，厌氧菌为3.94×1011cfu/ml，需氧菌和厌氧菌的比例为2.51∶1。

2.2 需氧菌的检出率及构成比统计

60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁需氧菌中链球菌属和奈瑟菌属的细菌检出率和构成比均较高（表1）。2.3厌氧菌的检出率及构成比

表1 30 ～50岁健康成人咽后壁需氧菌的检出率及构成比

60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁厌氧菌中检出率较高的是麻疹孪生球菌、普氏厌氧球菌、韦荣球菌、丙酸丙酸杆菌、解脲拟杆菌、厌氧消化链球菌、内氏放线菌、嗜酸乳杆菌，检出率高的细菌，其构成比也较高（表2）。

表2 咽后壁厌氧菌的检出率及构成比

益生菌是一种对人体具有积极的促进健康作用的微生态制剂。近年来，微生态制剂的开发和应用已成为研究热点。随着抗生素和免疫抑制剂的普遍应用，人们已经认识到其在恢复人体健康的同时，也带来某些菌群失调所引起的疾病，而微生态制剂能克服机体菌群失调的弊端。微生态制剂与药物不同，具有“已病辅治、未病防病、无病保健”的作用。临床上，益生菌可以拮抗感染、炎症等状态下的致病菌，从而发挥免疫调节作用，达到治疗和预防细菌感染性疾病的目的。

上呼吸道感染是临床最常见的感染性疾病之一，研制呼吸道微生态制剂对预防和治疗呼吸道细菌感染性疾病具有重要意义。在不同年龄阶段，健康人的咽部需氧菌和厌氧菌不断定植和演替，种类和比例也不断变化，达到一种动态平衡[8]。

本研究结果显示，从需氧菌的检出率来看，60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁检出率较高的菌种排在前5位的分别是缓症链球菌、口腔链球菌、干燥奈瑟球菌、唾液链球菌、微黄奈瑟球菌，其中缓症链球菌、口腔链球菌、唾液链球菌都属于甲型链球菌群，平均检出率达到了91.3%。干燥奈瑟球菌、微黄奈瑟球菌在分类上属于奈瑟菌属，平均检出率为83.0%。另外，本研究结果也显示，检出率较高的菌种，其构成比也相对较高。甲型链球菌群和奈瑟菌属的检出率和构成比分别占第1位和第2位，因此，甲型链球菌群和奈瑟菌属中的某些菌种被认为可能是健康成人上呼吸道呈优势生长的原籍菌。在厌氧菌中，60名沈阳市区30～50岁健康成人咽后壁检出率较高的菌种包括麻疹孪生球菌、普氏厌氧球菌、韦荣球菌、丙酸丙酸杆菌、解脲拟杆菌、厌氧消化链球菌、内氏放线菌、嗜酸乳杆菌，是上呼吸道的厌氧性优势菌群。这些存在于人类呼吸道黏膜表面的正常微生物群,是该部位重要的生理组成部分，在保持宿主呼吸道正常防御机制中起着关键作用[9]。

研究显示，机体上呼吸道黏膜表面的营养状况和氧化还原电位等因素决定着定植于黏膜表面的微生物种属和数量[10-12]。本研究结果显示，同一年龄段人群中的多数个体的上呼吸道菌群在结构和组成上具有相似性，而不同的个体之间菌群的种类和数量也可以存在一定差异；检出率和构成比均较高的菌种，其在成人上呼吸道的分布较为广泛，个体间差异较小，是上呼吸道优势菌群，因此可以考虑作为呼吸道黏膜益生菌制剂的备选菌株。

呼吸道感染的预防和治疗是一个复杂的过程。从菌群平衡角度来说，保持呼吸道正常菌群平衡对防治呼吸道感染至关重要[13-14]，因此，加强菌群平衡的监测，合理使用抗生素[15]势在必行。本研究分析了不同年龄的健康成人上呼吸道优势菌群，为研究呼吸道微生态制剂预防上呼吸道感染提供了科学依据。随着微生态学的发展，将会研制出更多的微生态制剂，利于增强和改善机体的各种生理功能，达到防病治病、增进体质、延缓衰老等目的。

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Analysis of micro ecological status of upper respiratory tract in adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang

XU JiaCHEN Kui-minCHEN Dong-meiXU JingHAI Xiao-ouZHOU YuanXIAO Chun-ling▲
Department of Pathogenic Biology Teaching,Shenyang Medical College Key Laboratory of Environmental Pollution and Micro-Ecology in Liaoning Province,Shenyang110034,China

[Abstract]Objective To understand the diversity of the upper respiratory tract microflora and the constitution of dominant microflora in healthy adults so as to provide a scientific basis for the prevention of respiratory tract infections via oral approach.Methods Altogether 60 healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang from April to June in 2012 were randomly selected as the objects of this research.The samples were collected through aseptic throat swab.The quantitative analysis and qualitative identification of microflora were made.Results The proportion between postpharyngeal aerobic bacteria and anaerobic bacteria in 60 healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang was 2.51∶1;the aerobic and anaerobic bacteria with higher detection rate included Streptococcus mitis, Streptococcus oralis,Streptococcus salivarius,Neisseria sicca,Neisseria cinerea and Measles twin cocci,Anaerococcus prevotii,Veillonella,Propionibacterium propionicus etc.;the bacteria with higher detection rate also had higher constituent ratio of strains.Conclusion The dominant microflora of upper respiratory tract pharynx is constituted by both the postpharyngeal aerobic bacteria and anaerobic bacteria with higher detection rate and higher constituent ratio in healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang,which plays an important role in maintaining the inherent ecological balance in the respiratory system,further clarifies its ecological significance,and provides a theoretical basis for the research on application of alternative probiotic strains in development of respiratory bacteria preparation.

[Key words]Respiratory tract;Aerobic bacteria;Anaerobic bacteria;Micro-ecology;Adult

[中图分类号]R117

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）03（a）-0156-03

（收稿日期：2016-12-23本文编辑：祁海文）

[基金项目]辽宁省科学技术计划项目（2013225086）；辽宁省沈阳市科学技术项目（F14-181-1-00）；辽宁省沈阳市科技计划项目（F13-220-9-36）

[作者简介]徐佳（1980-），女，硕士，讲师，研究方向：环境与健康、微生物、微生态

▲通讯作者