刻学博
山东省泰安市泰山区人民医院检验科，山东泰安　271000

[摘要]目的探讨HPV感染与宫颈癌的关系，为宫颈癌的筛查提供临床参考。方法收集2012年9月～2014年10月在我院就诊的宫颈癌患者200例，将其根据是否存在HPV感染分为HPV感染组和无HPV感染组，HPV感染组再分为单一感染组和多重感染组。结果单一感染率、多重感染率分别为60.0%、11.0%。单一感染率最高为HPV16，其次为HPV18、HPV58，其余亚型均＜2%。多重感染以二重感染为主，且以HPV16±58比例最高。在所有HPV感染中，大多数为含HPV16亚型的感染。多重感染组患者年龄与单一感染组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。多重感染组≥55岁的比例明显高于单一感染组（P＜0.05），两组病理类型均以鳞癌为主，病理分期均以浸润癌为主，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组淋巴结转移率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论HPV感染与宫颈癌存在一定关系，这可能对宫颈癌的筛查、预后有指导作用。

[关键词] HPV多重感染；HPV单一感染；宫颈癌

宫颈癌是女性生殖系统最常见的一种恶性肿瘤，其对女性生命健康造成严重影响。人乳头状瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌的发生起关键性作用已被大量研究所证实，它具有多种亚型，目前已知的有120种，根据感染状态，HPV感染分为单一亚型感染和多重感染（2种亚型以上的感染）[1]。二重感染和三重感染是最常见的多重感染类型。许多研究表明，多重感染与宫颈病变间有密切的相关性，是宫颈病变和宫颈癌发生的独立危险因素[2]。本研究收集200例宫颈癌患者，对其进行HPV感染监测，分析HPV感染与患者临床特征的关系，以期为宫颈癌的筛查及防治提供临床依据。

1.1　一般资料

收集2012年9月～2014年10月在我院就诊的宫颈癌患者200例，所有患者术前均接受HPV检测及术后病理确诊。患者年龄21～76（46.2±8.6）岁。根据是否存在HPV感染分为HPV感染组和无HPV感染组，并将HPV感染组细分为单一感染组和多重感染组。

1.2　HPV DNA检测

1.2.1　检测设备和试剂盒美国ABI公司PE9700扩增仪、德国QIAGEN公司医用核酸分子快速杂分仪；德国QIAGEN公司提供的HPV DNA抽提试剂盒及HPV基因分型检测试剂盒[可检测5种低危亚型（HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV 44）和13种高危亚型（HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68）]。另外膜上还包括质量控制的阴性对照点、监测PCR反应的内对照点和用于监测显色系统的Biotin对照点。

1.2.2标本DNA提取收集子宫颈脱落细胞，置于HPV专用保存液中保持，取0.5 m1上述液体，离心2 min，弃去上清液，用HPV DNA抽提试剂盒提取DNA，根据试剂盒操作说明书进行。

1.2.3　HPV亚型检测　采用HybrMax法[3]测定，将上述获得的HPV DNA扩增，把Taq酶、PCR MIX、水根据要求混匀，反应体系为25 μ1，PCR反应获得的产物进行加热变性后冰浴，随后置于杂交仪的薄膜（固定有核酸探针）上，让样品流入膜内进行导流杂交，清除未结合的DNA，杂交期间维持45℃。用封阻液封闭膜，培育5 min。排出封阻液后添加酶标液，室温下温育5 min。充分冲洗膜，清除未结合的酶标液，加入底物显色5 min，显色后1 h内分析结果。

1.3　HPV阳性判断标准[4]及多重感染表示方法

当RLU/CO≥1时为HPV阳性，其中RLU、CO分别为标本和标准阳性对照的相对光单位。多重感染以HPV亚型间用“±”连接，如“16±52”表示HPV16和HPV52双重感染；“16±35±56”表示HPV16、HPV35、HPV56三重感染。

1.4　统计学处理

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，采用x2检验，计量资料用±s表示，两组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。

2.1　一般情况

所有患者中有142例存在HPV感染，HPV感染率为71.0%（142/200），其中单一感染率、多重感染率分别为60.0%（120/200）、11.0%（22/200）。单一感染率最高为HPV16，其次为HPV18、HPV58，其余亚型均＜2%。多重感染以二重感染为主，且以HPV16± 58比例最高。在所有HPV感染中，大多数为含HPV16亚型的感染。混合感染亚型最多为四重感染（表1）。

2.2　宫颈癌患者HPV感染与临床特征的关系

单一感染组患者年龄为（49.1±9.6）岁，多重感染组患者为（53.5±11.7）岁，两组的年龄差异无统计学意义（t=1.608，P=0.218）。多重感染组≥55岁的比例明显高于单一感染组（P＜0.05），两组病理类型均以鳞癌为主，病理分期均以浸润癌为主，两组差异无统计学意义（P＞0.05）；两组淋巴结转移率比较差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

有研究报道，我国每年宫颈癌发生率约为28.7%[5]。在我国，20世纪90年代宫颈癌死亡率为3.25/10万，较20世纪70年代的9.98/10万明显降低[6]。宫颈癌病死总例数是所有恶性肿瘤病死患者数的18.4%[7]。近年来，宫颈癌发生有年轻化趋势，因而逐渐引起临床工作者的关注。

宫颈癌预后与其病理特征密切相关，如患者年龄、病理类型、病理分期等，而淋巴结转移是其中重要的一个相关因素[8]。近期，HPV检测技术逐渐在宫颈癌的筛查中得到推广应用，其对宫颈癌的预测价值深受研究者们的重视。王长奇等[9]的研究认为，HPV多种亚型同时感染对宫颈癌的发生及预后产生重要影响。Be11o等[10]对多重HPV感染与宫颈癌的相关性进行研究，结果显示多重感染风险明显高于单一感染患者。本研究结果显示，多重感染率为11.0%，单一感染率为60.0%。在120例单一感染患者中，HPV亚型比例最高者为HPV16，其次为HPV18、HPV58，这与姚敏等[11]的研究结果相似。双重感染随着地区及种族不同而有所不同，本研究中多重感染以二重感染多见，占多重感染的77.3%，其中HPV16+58最常见，其次为HPV16+52，而含HPV16的比例最高。可见，HPV16是单一感染或多重感染的最主要类型，这与吴玉萍等[12]的报道一致。

HPV多重感染与年龄有关。Swangvaree等[13]的研究指出，宫颈病变患者，＜40岁患者HPV多重感染率较高。也有研究报道，＜30岁人群多重感染率高[14]。这两个研究均说明年轻人群更易出现多重感染，但本研究则相反，≥55岁的宫颈癌患者发生HPV多重感染率大于＜55岁患者，说明多重感染更易出现在年龄较大患者中，其原因可能是随着年龄的增加，患者机体内原有的免疫力逐渐减弱或激素浓度改变而引起病毒复活。吕晓萍等[15]的研究报道，多重感染发生率和形式主要受方法学和检测间隔时间的影响，另外地理、遗传、种族等因素也会对研究结果产生影响。

目前，普遍认为，感染与宫颈癌的预后相关。Kjaer 等[16]的研究结果显示，合并HPV多重感染的宫颈癌患者，其治疗失败率是单一感染者的5倍，说明多重感染可能对宫颈癌预后产生不良影响。

总之，HPV感染与宫颈癌存在一定关系，但其在宫颈癌的发生及预后的作用机制尚不明确，需扩大样本进一步研究、证实。若能证实多重感染在宫颈癌中的作用机制将有利于对宫颈癌的防治，也能预测患者的预后，从而为制订合理的治疗方案提供依据。

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Research of relationshiP between HPV infection and cervical cancer

LIU Xue-bo
Department of C1inica1 Laboratory,Taishan District Peop1e' s Hospita1 in Taian City of Shandong Province,Taian 271000,China

[Abstract] Objective to study the re1ationship between HPV infection and cervica1 cancer to provide c1inica1 reference for cervica1 cancer screening. Methods 200 patients with cervica1 cancer treated in our hospita1 from September 2012 and October 2014 were co11ected.According to whether there was HPV infection,they were divided into HPV infection group and non HPV infection group,HPV infection group was further divided into sing1e infection group and mu1tip1e infection group. Results The sing1e infection rate and mu1tip1e infection rate was 60.0%,11.0% respective1y.The sing1e highest infection rate was HPV16,fo11owed by HPV18,HPV58 once again,the other subtypes were 1ess than 2%.Mu1tip1e infections was main1y doub1e infection,and the percentage of HPV16±58 was the highest.Among a11 HPV infection,the majority was the subtype of HPV16 infection.There was no statistica1 difference of age between mu1tip1e infection group and sing1e infection group (P＞0.05).The proportion of more than 55 years o1d in mu1tip1e infection group was obvious1y higher than that of sing1e infection group (P＜0.05).Patho1ogica1 type of 2 groups were main1y squamous ce11 carcinoma,patho-1ogica1 staging were invasive carcinoma,the difference was not statistica11y significant (P＞0.05);there was no statistica1 difference of 1ymph node metastasis rate between two groups (P＞0.05). Conclusion There is a certain re1ationship between HPV infection and cervica1 cancer,which may have a guiding ro1e for screening and prognosis of cervica1 cancer.

[Key words] HPV mu1tip1e infection;HPV sing1e infection;Cervica1 cancer

收稿日期：（2015-12-30本文编辑：许俊琴）

[中图分类号] R711.74　

[文献标识码] A　

[文章编号] 1674-4721（2016）03（c）-0132-03