刻振专1　　杨红梅2　　蔡常辉1　　陈述文1　　梁连辉1
1.广东省中山市第二人民医院检验科，广东中山　528447；2.广东省中山市人民医院急诊ICU，广东中山　528400

[摘要]目的探讨不同检测方法在吸毒人群筛查丙肝中的应用价值。方法选取2014年1～8月中山市第二人民医院“美沙酮门诊”定点收治的吸毒史部分患者194例，采用HCV-cAg ELISA试剂盒，HCV-Ab ELISA试剂盒，HCV-RNA PCR试剂盒分别检测。结果194例吸毒患者血样，HCV-RNA PCR阳性率为58.76%（114/194），HCV-Ab阳性率为63.92%%（124/194），HCV-cAg阳性检出率为32.47%（63/194）。HCV-Ab标志物阳性率显著高于HCV-cAg（x2=38.411，P＜0.01）。在HCV-Ab阴性样本中，有5例HCV-cAg阳性，其中4例HCV-RNA PCR结果阳性。结论不同检测方法的检测效果略有差异，临床上可考虑HCV-cAg与HCV-Ab联合检测优势互补，对吸毒高危人群联合筛查，将有效防止漏检。

[关键词]丙型肝炎病毒；丙肝病毒核心抗原；丙肝病毒抗体；联合检测

丙型肝炎（丙肝）在我国属乙类传染病[1]，其病原体是丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）[2]。据文献报道全球约有2亿人感染，感染率为3%，每年因HCV相关疾病死亡人数达35万之多，中国约有4000万人感染，感染率为3.2%，略高于全球平均水平[3-4]，而这些感染者中，＞60%为吸毒人员[5-6]。号称“沉默杀手”的丙肝具有隐匿性、慢性化特征，并可发展为肝硬化、肝癌，但因HCV具有高度变异性，目前尚无理想的预防性疫苗和特效药物治疗，只能采取保肝护肝治疗[7-8]，因此，建立早期、快速、准确、价廉的筛查方法，选择合适的检测策略，对HCV的防控和预后有重大意义。丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、HCV-RNA、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）是近年来应用较广的检测方法，其中HCV-cAg检测是新近发展的一项检测技术，其窗口期（PWP）较短，为13～15 d[9-10]，且不受机体免疫状态的影响。本文对中山市第二人民医院“美沙酮门诊”194名吸毒人员分别采集样本，同时进行HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA检测，以探讨HCV-cAg联合HCV-Ab检测在吸毒高危人群中的应用价值。

1.1　一般资料

2014年1～8月，选取中山市第二人民医院“美沙酮门诊”定点收治的吸毒史部分患者194例，其中男性为152例，女性为42例，年龄为20～65岁，平均（39.2± 5.4）岁。入选标准：男女不限；精神状况正常；肝肾等重要脏器无严重并发症者；参与者知情并同意本次研究；经中山市第二人民医院医学伦理委员会批准。参照中山卫计局立项编号：2015A020183的立项要求开展本研究。

1.2　方法

采集患者的静脉血两支，1支为无抗凝管，用于检测HCV-cAg和HCV-Ab；1支为EDTA-K2管，及时分离血浆，低温-20℃保存，用于检测HCV-RNA。

1.2.1 HCV-Ab检测试剂由北京万泰生物药业股份有限公司提供，采用ELISA，严格按试剂说明书操作，阳性结果均双孔进行复检。检测过程：包被微孔中加入100 μ1样品稀释液，再加入10 μ1样品，充分混匀，置入37℃水浴箱30 min，取出依次反复洗涤5次，拍干，加入50 μ1酶标志物，置入37℃水浴箱20 min，取出同上洗涤5次，拍干，待显色。

1.2.2 HCV-cAg检测试剂由湖南康润制药股份有限公司提供，采用双抗夹心ELISA，严格按试剂说明书操作，阳性结果均进行双孔复检。检测过程：微孔条固定在支架，加入100 μ1样品稀释液，充分混匀，加入封板膜，置于30℃中温育30 min，洗涤液洗涤5次，扣干，加入显色剂50 μ1，轻轻混匀，37℃避光显色10 min，每孔加入50 μ1终止液，轻轻混匀，测量。

1.2.3　HCV-RNA检测试剂由中山大学基因股份有限公司提供，采用荧光定量PCR仪进行病毒定量检测，观察HCV-RNA水平，严格按说明书操作。

1.3　丙肝诊断阳性标准

①ELISA检测HCV-Ab的阳性标准：样品OD值≥临界值为HCV-Ab阳性。②ELISA检测HCV-cAg的阳性标准：样品OD值≥临界值为HCV-cAg阳性。③荧光定量PCR法检测HCV-RNA的阳性标准：拷贝数＞1.0×103判定为阳性。

1.4　统计学处理

使用SPSS 17.0统计软件进行数据统计和分析，计数资料以百分率表示，采取x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

194　例吸毒患者血样，HCV-RNA PCR定量检测，阳性率为58.76%（114/194）。HCV-Ab阳性率为63.92%（124/194）；HCV-cAg阳性检出率为32.47% （63/194），HCV-Ab标志物阳性率显著高于HCV-cAg （x2=38.411，P＜0.01），提示两种检测方法的诊断水平有差异。HCV-Ab的阳性检出率更高，但对HCV-Ab阴性样本，有5例HCV-cAg阳性，其中4例HCV-RNA PCR结果阳性，出现病毒复制（表1）。HCV-cAg与HCVAb在人体体内的浓度转换过程见图1。

目前，我国对HCV的筛查主要是ELISA检测HCVAb[11]，初筛结果阴性，报告HCV-Ab阴性，不再进行复检。初筛结果阳性，才进行后续的复检程序。然而，ELISA检测HCV-Ab具有一定的局限性，尤其是吸毒高危人群极易漏检，原因有以下几点[12-15]：①HCV-Ab检测的PWP较长，平均为70 d；②与机体免疫状态有关，免疫缺陷、器官移植、血液透析、使用免疫抑制剂治疗等免疫虚损患者，产生抗体的浓度极低，超出现有试剂ELISA的检测下限；③为了防止高IgG血症及类湿因子等的干扰，一般ELISA检测HCV-Ab需稀释样本，加血清量较少，加样器不准确也是可能漏检的原因之一。

HCV-cAg与HCV-Ab是筛查HCV感染的两种标志物，两者在体内的浓度存在相互主导转换的一个过程，如图1所示，感染早期，HCV-cAg几乎与HCVRNA同时出现，机体内一定量的HCV-cAg不断刺激机体产生抗体，几乎所有的HCV-Ab全部与HCV-cAg结合，此时HCV-cAg过量，而ELISA只能检测游离状态的HCV-Ab或HCV-cAg，因此会出现HCVAb阴性，HCV-cAg阳性的情况，这也是两者检测PWP不同的原因之一[16]。随着病情的发展，机体产生HCV-Ab浓度逐步升高，与HCV-cAg结合后，游离HCV-cAg浓度逐步下降，在病程的中后期，患者体内的HCV-cAg全部被HCV-Ab结合形成免疫复合物，游离的HCV-cAg浓度低于检测下限为阴性，而HCV-Ab浓度进一步升高，检测则为阳性，因此，从患者感染HCV全程来看，单纯依靠HCV-Ab或HCV-cAg标志物来检测，极易可能造成漏检或误诊。

实时荧光PCR定量检测HCV-RNA是诊断HCV感染的“金标准”，但由于其耗时长，实验条件要求高，仪器和试剂贵，且RNA室温易降解，结合我国国情，作为常规筛查手段，难以全面推广。

综上所述，不同检测方法的检测效果略有差异，临床上可考虑HCV-cAg与HCV-Ab联合检测优势互补，对吸毒高危人群联合筛查，将有效防止漏检。

[1]张艳辉，鲍宇刚，孙江平，等.我国15个城市吸毒人群HIV、梅毒螺旋体、丙型肝炎病毒感染现况[J].中华预防医学杂志，2010，44（11）：969-974.

[2] Liang M，Wang L，Ma CX，et al.Sandwich immunoassay for hepatitis C virus non-structura1 5A protein using a g1assy carbon e1ectrode modified with an Au -MoO3/chitosan nanocomposite[J].Ana1 Lett，2013，46（8）：1241-1254.

[3] Martins T，Narciso-Schiavon JL，Schiavon Lde L.Epidemio1ogy of hepatitis C virus infection[J].Rev Assoc Med Bras，2011，57（1）：107-112.

[4] Cheva1iez S.Viro1ogica1 too1s to diagnose and monitor hepatitis C virus infection[J].C1in Microbio1 Infect，2011，17（2）：116-121.

[5]文育锋，张振，齐少波，等.吸毒人群行为特征与梅毒、丙肝感染的相关性分析[J].皖南医学院学报，2014，33（4）：362-364.

[6]陈培杰，黄奇峰，谢玉程，等.苍南县吸毒者丙型肝炎感染状况调查[J].浙江预防医学，2010，22（6）：33-34.

[7] Xing XK，Li SJ，He JL，et al.Inhibition of hepatitis C virus rep1ication by sing1e and dua1 sma11 interfering RNA using an HCV-infected ce11 mode1[J].Biotechno1 Lett，2012，34（2）：295-301.

[8] Jiang L，Gu Y，Ye J，et al.Resveratro1 prevents hepatic steatosis induced by hepatitis C virus core protein[J].Biotechno1 Lett，2012，34（12）：2205-2212.

[9] Ergunay K，Sener B，A1p A，etal.Uti1ityofacommercia1quantitative hepatitis C virus core antigen assay in a diagnostic 1aboratory setting[J].Diagn Microbio1 Infect Dis，2011，70（4）：486-491.

[10] Lee SR，Peterson，J，Niven P，et al.Effficacy of a hepatitis C virus，core antigen enzyme-1inked immuosorbent assay for the identification of 'window-phase' b1ood donations[J]. Vox Sang，2001，80（1）：19-23.

[11]刘艳明.ELISA与CMIA检测血清中抗-HCV的比较[J].中国当代医药，2013，20（32）：104-105.

[12]涂业桃.胶体金法与ELISA法在检测丙型肝炎病毒抗体中的比较[J].医学综述，2014，20（20）：3836-3837.

[13]朱红艳，毕胜，杨曦，等.丙型肝炎病毒核酸和抗体检测方法在人群筛查中的比较及应用[J].国际检验医学杂志，2014，35（20）：2811-2812，2815.

[14]胡芳.抗体ELISA检测联合丙肝病毒核心抗原检测在丙肝治疗中的意义[J].中外医疗，2014，33（25）：185-186.

[15]王政.ELISA法和化学发光法对脐血中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测比较[J].中国社区医师，2014，30（36）：144-145.

[16]王少敏，陈杰，谢圣高.慢性丙型病毒性肝炎患者血清sICAM-1与肝组织病理变化的相关性研究[J].中国当代医药，2009，16（25）：124-125.

APPlication value of different determination method in screening hePatitis C in drug users

LIU Zhen-zhuan1YANG Hong-mei2CAI Chang-hui1CHEN Shu-wen1LIANG Lian-hui1
1.Department of C1inica1 Laboratory,the Second Peop1e's Hospita1 of Zhongshan City in Guangdong Province,Zhongshan 528447,China;2.ICU of Emergency,Zhongshan Peop1e's Hospita1 in Province,Zhongshan 528400,China

[Abstract] Objective To exp1ore the app1ication va1ue of different determination method in screening hepatitis C in drug users. Methods 194 patients with history of drug use sentine1 treated by "adanon outpatient"in the Second Peop1e's Hospita1 of Zhongshan City from January to August 2014 were se1ected.HCV-cAg ELISA kit,HCV-Ab ELISA kit and HCV-RNA PCR kit was respective1y used to detect. Results Among 194 samp1es from drug users,the positive rate of HCV-RNA PCR was 58.76% (114/194),the positive rate of HCV-Ab was 63.92% (124/194),the positive detection rate of HCV-cAg was 32.47% (63/194).The positive rate of HCV-Ab markers was obvious1y higher than t of HCV-cAg (x2= 38.411,P＜0.01).Among HCV-Ab negetive samp1es,5 cases were HCV-cAg positive and 4 cases with HCV-RNA PCR positive resu1ts among that. Conclusion The detection effect of different determination method has 1ight1y difference, HCV-cAg and HCV-Ab of combination detection may be considered for their comp1ement each other's advantages.Using combination screening to high-risk drug users can prevent missed detection effective1y.

[Key words] Hepatitis C virus;HCV-cAg;HCV-Ab;Combined detection

收稿日期：（2015-11-30本文编辑：许俊琴）

[基金项目]广东省中山市医学科研项目（2015A020183）

[中图分类号] R512.6+3　

[文献标识码] A　

[文章编号] 1674-4721（2016）03（c）-0129-03