潘晓琴 谭传梅 唐红艳 丁异熠

湖南省常德市第一人民医院儿科，湖南常德415003

[摘要]目的探讨Xpert MTB/RIF检测法在儿童肺泡灌洗液结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法选择2014年4月～2016年4月于常德市第一人民医院儿科住院的162例疑似肺结核患儿为研究对象，同时采用直接涂片抗酸染色法、离心涂片抗酸染色法和XpertMTB/RIF检测法检测患儿肺泡灌洗液中抗酸杆菌，比较三种方法抗酸杆菌的阳性率。结果直接涂片抗酸染色法、离心涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF检测法的阳性率分别为14.8％、29.6％、78.3％，离心涂片抗酸染色法阳性率高于直接涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（配对χ2=4.56，P＜0.05）；XpertMTB/RIF检测法高于离心涂片法，差异有统计学意义（配对χ2=16.32，P＜0.01）。结论三种方法中，XpertMTB/RIF检测法是一种快速、简便、阳性率高的检测技术，值得临床推广应用。

[关键词]肺泡灌洗液；肺结核；儿童；XpertMTB/R IF

肺结核（pulmonary tuberculosis，PTB）是危害小儿健康的严重疾病。随着艾滋病等免疫低下疾病发病率的增加，人群流动、结核耐药增多以及防控体系不完善等，全球结核病疫情不容乐观，发病率增加[1]，儿童结核病的发病率也逐步上升。由于结核杆菌阳性是确诊小儿肺结核的金标准[2]，对于疑难病例的诊断至关重要，强调常规进行细菌学检查为患儿早诊断、早治疗提供强有力的帮助。由于患儿采用标准取痰方法较困难，本研究采用纤维支气管镜行肺泡灌洗液，分别予直接涂片抗酸染色法、离心涂片抗酸染色法和XpertMTB/RIF检测法对灌洗液进行结核分枝杆菌的检测，探讨不同检测方法在儿童肺结核诊断中的应用价值。

1.1 对象

选择2014年4月～2016年4月于常德市第一人民医院（以下简称“我院”）儿科住院的162例疑似肺结核患儿为研究对象。其中男98例，女64例；年龄

2～14岁，2～6岁36例，6～10岁54例，10～14岁72例。所有患儿既往均无肺结核治疗史，排除合并白血病、先心病等重大疾病及长期糖皮质激素等免疫抑制剂治疗者。纳入标准：入组病例诊断均符合中华医学会儿科分会制订的儿童肺结核临床诊断标准[3]：①有典型的肺结核影像学改变者；②临床表现为咳嗽、咳痰2周，或咯血者；③PPD硬结平均直径15mm或局部出现水泡、坏死及淋巴管炎者；④结核抗体检查等其他辅助检查阳性者；⑤肺外组织病检证实为结核病变者；⑥经诊断性治疗或随访观察可排除其他肺部疾病者。具有以上6项中任意一项者，可临床诊断。所有病例均具有儿科支气管镜检查的适应证[4]。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有患儿的监护人均知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 灌洗液采集局麻后，患儿取仰卧位，纤维支气管镜（Olympus P260F）经鼻腔进入，检查各部分病变情况后，在病灶部位注入适量生理盐水，收集灌洗液。将灌洗液分为3份，分别用于直接涂片抗酸染色法、离心涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF检测。

1.2.2 直接涂片抗酸染色法依据《中国结核病防治规划实施工作指南（2008年版）》进行。将灌洗液直接涂布在玻片上，均匀抹成10mm×20mm的卵圆形液膜，固定后滴加石炭酸复红染液，染色10～15 min，3％盐酸酒精脱色1 min，美蓝复染0.5～1 min，流水冲洗后待干镜检[5]。

1.2.3 离心涂片法取2 ml灌洗液加入一次性试管中，在4℃下以3000 r/min离心15 min，弃掉上清液，混匀试管底部沉渣进行涂片，涂布面积1 cm×2 cm，然后行抗酸染色及镜检。

1.2.4 Xper t MTB/RIF检测取2 ml灌洗液标本与含氢氧化钠及异丙醇的处理液混合，在涡旋震荡器上震荡15～30 s，室温静置15 min。取混合液2 ml转移至一次性多室塑料反应盒中，然后将反应盒放置到检测模块，采用Xpert MTB/RIF检测仪（美国Cepheid公司）进行自动化分析，约2 h后可读取结果[6-7]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 直接涂片抗酸染色法与离心涂片抗酸染色法检测情况

162例灌洗液标本中，直接涂片抗酸染色法抗酸杆菌阳性24例，阳性率为14.8％；离心涂片抗酸染色法抗酸杆菌阳性48例，阳性率为29.6％；离心涂片抗酸染色法抗酸杆菌阳性率明显高于直接涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（χ2=4.56，P＜0.05）（表1）。

表1 直接涂片抗酸染色法与离心涂片抗酸染色法抗酸杆菌检测结果比较（例）

 

配对χ2=4.56，P＜0.05

2.2 离心涂片抗酸染色法与Xpert MTB/RIF检测法检测结果比较

在162例灌洗液标本中，离心涂片抗酸染色法抗酸杆菌阳性48例，阳性率为29.6％；Xpert MTB/RIF检测法抗酸杆菌阳性127例，阳性率为78.3％；Xpert MTB/RIF检测法抗酸杆菌阳性率明显高于离心涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（χ2=16.32，P＜0.01）（表2）。

表2 直接涂片抗酸染色法与离心涂片抗酸染色法检测结果比较（例）

 

配对χ2=16.32，P＜0.01

据世界卫生组织（WHO）2015年报告：全球有950万人患结核病，2014年150万人因结核病死亡；100万名儿童患结核病和14万名儿童死于结核病。我国结核病人数居世界第3位，仅次于印度及印度尼西亚，为结核高负担国家之一[8]，结核病疫情不容乐观给社会带了极大的隐患。由于儿童个体的特殊性，儿童感染结核缺乏典型症状，病情常出现隐匿，临床表现复杂[9]，加之取痰困难，儿童肺结核的诊断较成年人肺结核更为困难，易误诊为呼吸道感染，所以儿童肺结核的早期实验室诊断尤为重要。

抗酸染色检测结核杆菌经济、简便、快速的优势使其在全国得到了普遍应用，但阳性率不高，痰涂片镜检在儿童标本中的阳性率不足15％[10]。结核分枝杆菌培养阳性是诊断结核病的“金标准”，但培养常需

4～8周才能获得结果，且儿童中的阳性率仅为30％～40％[11-12]，患儿不能及时得到诊治而延误治疗。患儿取得痰标本十分困难，本研究采用纤维支气管镜检查技术，不仅可以直接观察病变部位，还通过肺泡灌洗解决了标本采集的问题，提高了诊断效率[13]。本研究收集了162例疑似肺结核患儿灌洗液标本，分成3份分别行直接涂片抗酸染色法、离心涂片抗酸染色法和XpertMTB/RIF检测法检测抗酸杆菌。结果直接涂片抗酸染色法阳性24例，阳性率为14.8％；离心涂片抗酸染色法阳性48例，阳性率为29.6％；离心涂片抗酸染色法明显高于直接涂片抗酸染色法，差异有统计学意义（χ2=4.56，P＜0.05）。这可能与离心涂片法通过高速离心使结核菌沉淀下来，达到一定的浓集效果，增加了病菌的密度有关[14]。

XpertMTB/RIF检测法是以半巢式实时定量PCR技术为基础，以利福平耐药相关rpob基因为靶基因，自动提取DNA后扩增rpob基因的192 bp片段进行检测，2 h实现同时检测结核分枝杆菌和利福平耐药，其巢式PCR的应用使其敏感性增高2～3个数量级，减少了非特异性的扩增。本研究在162例灌洗液标本中，离心涂片抗酸染色法阳性48例，阳性率为29.6％；XpertMTB/RIF检测法阳性127例，阳性率为78.3％；Xpert MTB/RIF检测法明显高于离心涂片抗酸染色法（χ2=16.32，P＜0.01）。

目前Xpert MTB/RIF检测仪器昂贵，收费贵。但该系统封闭性及自动化程度高，技术人员仅需将处理好样本加入反应孔内，可自动完成标本纯化、离心、DNA提取、DNA特异序列检测、自动读出结果，不仅快，还降低了生物安全的风险，为WHO推荐的结核分枝杆菌检测方法[15]。

综上所述，Xpert MTB/RIF检测法快速、简便、阳性率高，明显优于传统直接涂片抗酸染色法和离心涂片抗酸染色法。对于儿童早期肺结核诊断有重大意义，值得结核病相关机构推广应用。

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App lication value of Xpert M TB/RIF detection system in children pulmonary tuberculosis lavage fluid

PAN Xiao-qin TAN Chuan-mei TANG Hong-yan DING Yi-yi
Department of Pediatrics,the First People′s Hospital of Changde,Hu′nan Province,Changde 415003,China

[Abstract]Objective To explore the application value of Xpert MTB/RIF in testing ofmycobacterium tuberculosis in bronchoalveolar lavage fluid.M ethods From April 2014 to April 2016,162 children with suspected tuberculosis in Department of Pediatrics of the First People′s Hospital of Changde were selected as the research objects,at the same time direct smear acid-fast stain,centrifugation-smear acid-fast stain and MTB/RIF test were used to detect the acid-fast bacillus in alveolar lavage fluid,and the positive rate of acid-fast bacillus of threemethodswas compared.Results Positive rate of direct smear anti-acid stain,centrifugation-smear acid-fast stain and Xpert MTB/RIF test were 14.8％, 29.6％,78.3％respectively.The positive rate of the centrifugation-smear acid-fast stain was higher than that of the direct smear anti-acid stain the positive rate,the difference was statistically significant(χ2=4.56,P＜0.05);compared with centrifugation-smear anti-acid stain method,the positive rate of the Xpert MTB/RIF test was higher than that of the centrifugation-smear acid-fast stain,the difference was statistically significant(χ2=16.32,P＜0.01).Conclusion Among the threemethods,Xpert MTB/RIF test is a technology,that rapid,convenient,and with high positive rate,it is worthy of clinical application.

[Key words]Bronchoalveolar Lavage Fluid;Pulmonary Tuberculosis;Children;XpertMTB/RIF

[中图分类号]R725.1

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2016）11（b）-0096-03

（收稿日期：2016-08-08本文编辑：任念）

[作者简介]潘晓琴（1983-），女，本科，主治医师，主要从事小儿感染性疾病的临床工作