秦永章 肖丽霞 柯瑞琼 洪世华 吕维名

赣南医学院第一附属医院内分泌科，江西赣州341000

[摘要]目的探讨5-HTTLPR基因多态性与氟西汀治疗糖尿病周围神经性疼痛效果的关系。方法选取我院2014年1月～2015年5月收治的48例糖尿病周围神经性疼痛患者作为研究对象，所有受试者均给予氟西汀治疗8周，采用聚合酶链反应（PCR）技术检测5-HTTLPR基因多态性。结果入组基因分型L/L、L/S型和S/S型的患者分别为7、15和26例，治疗后的SF-MPQ分值为（18.3±3.9）分、（22.8±4.6）分和（25.4±5.4）分，分别低于治疗前的（45.3± 5.2）分、（44.8±6.1）分和（45.7±4.9）分，差异有统计学意义（P＜0.05）；对应的SF-MPQ下降幅度分别为（26.2±3.7）分、（21.1±4.3）分和（20.6±5.1）分，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）。L/L与L/S基因组的减分率＞50％，且L/L基因型组的减分率显著高于其他两组，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论5-HTTLPR基因多态性可能与氟西汀治疗糖尿病周围神经性疼痛的效果相关。

[关键词]氟西汀；糖尿病；神经病变疼痛；5-HTTLPR基因

调查研究结果显示，糖尿病患者中出现糖尿病周围神经病变的概率已经＞50％[1]，发展为糖尿病周围神经性疼痛的概率为10％～20％[2]。在疼痛调调节中，5-HT发挥着重要作用[3]，而5-HT在体内的生理功能则是通过5-HTTLPR基因调控5-HTT蛋白的转录活动而受到影响[4]。度洛西汀能够通过对5-HT作用而调节内源性疼痛抑制通路[5]，成为第一个被FDA批准用于治疗糖尿病周围神经性疼痛的药物。氟西汀与度洛西汀有类似的药物作用机制[6]，故本研究在前期研究[7-8]的基础上拟探讨5-HTTLPR基因多态性与氟西汀治疗糖尿病周围神经性疼痛是否存在关联性。

1.1 一般资料

选取我院2014年1月～2015年5月收治的48例2型糖尿病周围神经性疼痛患者作为研究对象，其中男性20例，女性28例；年龄40～75岁，平均（50.28± 3.84）岁；病程4～12年。所有入选患者均符合1999年WHO糖尿病诊断标准[9]，伴有感觉及（或）运动神经障碍，肌腱反射减弱或消失及（或）伴有感觉异常，肌电图检查表明神经的运动和感觉传导速度减弱[10]；疼痛症状出现时间为1周～6个月，且近4周内未行针对疼痛的任何相关治疗；均排除外周动脉疾病引起的疼痛，排除严重心、肝、肾等重要脏器疾病，排除妊娠及哺乳期妇女、痛经患者。本研究方案经我院医学伦理委员会批准且患者及家属均知情同意。

1.2 材料

LA-Taq DNA聚合酶、dNTPs购自中国大连宝生物公司，引物引用原始文献序列，具体如下。上游引物：5′-GGCGTTGCCGCTCTGAATGC-3′；下游引物：5′-GAGGGACTGAGCT-GGACAACCAC-3′，由山东省内分泌与代谢病研究所提供。

1.3 研究方法

1.3.1 DNA提取采集患者5ml外周静脉血，2％EDTA抗凝，采用改良苯酚氯仿抽提法提取白细胞总DNA，置-70℃保存备用[11]。

1.3.2 多聚酶链反应（PCR）扩增目的基因采用PCR扩增目的DNA并进行基因分型。PCR反应总体系20μl，约含200 ng基因组DNA、1 U Taq DNA聚合酶、0.2mmoldNTPs、2μl10×缓冲液、1.5mmolMg2＋和6 pmol引物。PCR温度循环条件参考文献[4]即可。以DNA Marker DL2000作为扩增产物分子量参照物比对。

1.3.3 基因型判读PCR产物经2％琼脂糖凝胶在120 V电压下，电泳30 min。采用荧光成像分析系统观察，基因片段528 bp与484 bp可被检测到。5-HTTLPR基因扩增产物分为S/S型、L/S型和L/L型3种基因型，结果见图1。

 

图1 5-HTTLPR基因琼脂糖凝胶电泳图

1、2、6为基因型L/S，3为DNAMarker，4为基因型L/L，5为基因型S/S

1.3.4 给药方法所有入选患者原有的降血糖治疗方案保持不变，每日早晨空腹给予氟西汀20 mg（百忧解，20 mg×28片，礼来苏州制药有限公司，国药准字J20120001），1次/d，治疗8周。治疗期间禁止使用扩张血管药物、止痛药、糖尿病营养神经药物以及其他可以缓解疼痛的药物。治疗开始以及结束后均采用简化McGill疼痛问卷（SF-MPQ）进行疼痛评分，以治疗前后SF-MPQ减分率≥50％作为有效的评价标准，反之为无效[3]。

1.4 疼痛评分

采用SF-MPQ进行疼痛评分，分别由两位专业医师对同一患者进行评分，取平均分。SF-MPQ包括疼痛评级指数（PRI，分感觉项和情感项，共0～45分）、视觉模拟疼痛评分（VAS，0～10分）和现时疼痛强度评分（PPI，0～5分）。

1.5 统计学处理

采用SPSS 16.0统计学软件对数据进行处理，采用吻合度χ2检验判断5-HTTLPR各基因型频率是否符合Hardy-Weinberg（H-W）遗传平衡定律，计量资料以±s表示，组内比较采用t检验，组间比较采用方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 遗传吻合度检验

入组基因分型L/L、L/S型和S/S型的患者分别为7、15和26例。采用H-W平衡检验来评估样本的群体代表性，假设检验公式为χ2=（a＋b＋c）（b2-4ac）/（2a＋b）2（b＋2c）2，式中，自由度=基因数-等位基因数。a、c为纯合基因型实际观测值，b为杂合基因型实际观测值。研究对象基因型符合H-W遗传平衡定律（χ2=2.03，P＞0.05），样本具有群体代表性。

2.2 氟西汀治疗前后及不同基因型患者SF-MPQ评分的比较

治疗后的SF-MPQ评分较治疗前显著下降，差异有统计学意义（P＜0.01），不同基因型之间的SF-MPQ减分比较，差异有统计学意义（P＜0.05），L/L与L/S基因组的减分率＞50％，且L/L基因型的减分率高于其他两型，差异有统计学意义（P＜0.01）（表1）。

表1 5-HTTLPR基因多态性的不同基因型患者组的疗效比较（±s）

 

与相同基因治疗前比较，*P＜0.05；与S/S型比较，#P＜0.01；与L/S型比较，△P＜0.01

随着糖尿病发病率的升高，糖尿病周围神经病变性疼痛的发病率也随之增加，目前关于其发病机制的报道较多，但无统一明确结论，故临床常采用不同的药物来缓解患者的疼痛。氟西汀通过抑制5-HT和去甲肾上腺素（NE）再摄取提高其在大脑和脊髓的浓度，从而抑制大脑和脊髓疼痛传导通路过度兴奋，提高疼痛阈值，达到镇痛效果[12]。目前，已有关于氟西汀治疗糖尿病周围神经性疼痛效果的报道[3，13]，本研究结果再次表明其有效性，但作为治疗糖尿病抑郁症及周围神经病变共同联结体的5-HT[14]其生理功能会受5-HTT转录表达的影响，5-HTTLPR的3种不同基因型（L/L、L/S、S/S）导致5-HTT基因表达水平不一致，进而可能使其对药物的治疗敏感性存在差异。有研究显示，表现为S型占优势的变异体呈现5-HTT基因的低表达，结果导致5-HTT摄取和释放5-HT的能力下降，而在L型则表现为增加5-HTT基因的表达水平，转录活性约为S型的3倍[15]。本研究比较了三种不同基因型患者对氟西汀治疗DPNP的疗效，结果显示，不同基因型其疗效存在显著性差异，说明L/L与L/S型基因型患者应用氟西汀治疗8周后均有效果，而S/S型疗效则不是很明显，L/L基因型患者治疗后的SF-MPQ减分率比另两种基因型高，提示5-HTYLPR多态性与氟西汀治疗DPNP的效果相关，L/L基因型可能是氟西汀治疗的敏感基因型。

本研究样本量小且局限于赣州本地的汉族人群，结果可能出现偏差，故需要大样本不同种族患者的进一步研究明确5-HTTLPR和氟西汀治疗糖尿病周围神经性疼痛的关系。

[1]World Health Organization.Diabetes[EB/OL].http：//www.who. int/mediacentre/factsheets/fs312/en/.Accessed May 2，2009.

[2]Argoff CE，Cole BE，Fishbain DA，et al.Diabetic peripheral neuropathic pain：clinical and quality-of-life issues[A]// Mayo Clinic Proceedings[C].Elsevier，2006.

[3]李毅.度洛西汀治疗糖尿病周围神经病变性疼痛的疗效研究[D].重庆：重庆医科大学，2014.

[4]秦永章，荣海钦，季虹，等.5-HTTLPR基因多态性与2型糖尿病关联性研究[J].医学研究杂志，2011，40（7）：88-90.

[5]Freeman R，Durso-DeCruz E，Emir B.Efficacy，safety，and tolerability of Pregabalin treatment for painful diabetic Peripheral neuropathy findings from seven randomized，controlled trials across a range of doses[J].Diabetes Care，2008，31（7）：1448-1454.

[6]孙燕霞，李淑萍.氟西汀改善脑卒中后抑郁及神经功能缺损患者的临床分析[J].齐齐哈尔医学院学报，2014，35（10）：1531-1532.

[7]秦永章，柯瑞琼，肖丽霞，等.氟西汀治疗糖尿病痛性神经病变的疗效分析[J].中国现代医生，2015，53（28）：53-55.

[8]秦永章，胡敬，荣海钦.5-羟色胺参与血糖调控的机制[J].中国医药指南，2010，8（24）：32-35.

[9]张蕾，柯瑞琼，欧阳灿晖，等.二甲双胍联合格列美脲治疗非酒精性脂肪肝合并2型糖尿病肥胖患者的效果观察[J].中国当代医药，2016，23（20）：132-134.

[10]张晓凡，李素霞，马沙.阿米替林联合α-硫辛酸治疗痛性糖尿病周围神经病变临床疗效[J].中国现代药物应用，2014，8（17）：11-12.

[11]柴巧莲.5-HTTLPR与应激的交互效应对焦虑症状的预测作用[D].长沙：中南大学，2014.

[12]强晓菲.氟西汀促进脑神经功能修复的机制研究[D].石家庄：河北医科大学，2013.

[13]尹岩，刘盈，张慧杰，等.5-羟色胺转运体基因多态性与氟西汀疗效及副反应的关系[J].中国神经精神疾病杂志，2008，34（12）：739-742.

[14]张鑫蕊.5-羟色胺与糖尿病周围神经病变伴发抑郁的关系[D].大连：大连医科大学，2014.

[15]Heils A，Teufel A，Petri S，et al.Allelic variation of human serotonin transporter gene expression[J].JNeurochem，1996，66（6）：2621-2624.

Relationship between the 5-HTTLPR gene polymorphism and the therapeutic effect of diabetic peripheral neuropathic pain

QIN Yong-zhang XIAO Li-xia KE Rui-qiong HONG Shi-hua LYUWei-ming
Department of Endocrinology and Metabolism,the First Affiliate Hospital of Gannan Medical University,Jiangxi Province,Ganzhou 341000,China

[Abstract]Objective To explored the relationship between the 5-HTTLPR gene polymorphism and the therapeutic effect of Fluoxetine in the treatment of diabetic peripheral neuropathic pain.M ethods 48 patientswith diabetic peripheral neuropathic pain in ourhospital from January 2014 toMay 2015were selected and given Fluoxetine treatment for 8weeks. The PCR technology was used to examine the 5-HTTLPR gene polymorphism.Results There were 7,15 and 26 cases in L/L,L/S and S/S genotypes,respectively.The scores of SF-MPQ were(18.3±3.9)points,(22.8±4.6)points,and(25.4±5.4) points after treatment of L/L,L/S and S/S patients,compared with the scores of(45.3±5.2)points,(44.8±6.1)points and (45.7±4.9)points before treatment,respectively,with significant difference(P＜0.05).The corresponding reductions of SFMPQ was(26.2±3.7)points,(21.1±4.3)points and(20.6±5.1)points,respectively,and there was significant difference between after treatment and before treatment(P＜0.05).The reduction rate of L/L and L/Sgenomeweremore than 50％, and the reduction rate of L/L genotype was higher than that the other two genomes,with significant difference(P＜0.01). Conclusion 5-HTTLPR gene polymorphism may be associated with the effect of Fluoxetine in the treatment of diabetic peripheral neuropathic pain.

[Key words]Flnoxetine;Diabetes;Neuropathic pain;5-HTTLPR gene

[中图分类号]R587.2

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2016）11（b）-0044-03

（收稿日期：2016-09-01本文编辑：祁海文）

[基金项目]江西省赣州市指导性科技计划项目（GZ2014ZSF072）

[作者简介]秦永章（1984-），男，硕士，主治医师，主要从事内分泌代谢性疾病研究