针刺不同穴组对慢性疲劳综合征小鼠行为及抗氧化能力的影响
翟　恒　张宝文▲　苑　迅
大连大学医学院，辽宁大连116622
［摘要］目的　比较针刺不同穴组对慢性疲劳综合征（CFS）小鼠的治疗作用。方法　雄性昆明小鼠60只，适应性饲养3 d后随机分为正常组、模型组、“合谷、太冲”组、“合谷、太冲、三阴交”组、“合谷、太冲、足三里”组，每组12只。采用慢性束缚+力竭游泳复合因素建立CFS模型，共12 d。治疗7 d后观察各组小鼠行为学改变，检测血清抗氧化指标。结果　①模型组与正常组比较，悬尾不动时间延长，水平运动、垂直运动得分减少，血清丙二醛（MDA）含量增加、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。②各针刺组与模型组比较，悬尾不动时间缩短，水平运动、垂直运动得分增加，血清MDA含量减少，SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义（P＜0.05），其中“合谷、太冲、足三里”组改善最为显著（P＜0.01）。③“合谷、太冲、足三里”组与其余两针刺组比较，血清MDA含量减少、SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　针刺各组腧穴均能对CFS小鼠起到明显的治疗作用，其中“合谷、太冲、足三里”穴组治疗效果最佳，其配伍作用更符合CFS的基本病机。
［关键词］针刺疗法；穴组；慢性疲劳综合征；抗氧化
慢性疲劳综合征（chronic fatigue syndrome，CFS）是以持续或反复发作的严重疲劳为主要表现的一组证候群［1］。由于该病的临床表现及发病机制复杂，相对于西医学疗法，针灸可从整体上调节机体功能，在CFS治疗中具有明显优势。从目前针灸治疗CFS的研究现况来看［2-3］，大多数研究重点主要集中于针灸的起效机制和不同针灸疗法的疗效比较，缺少针对CFS基本病机的组穴研究。本实验选用对CFS具有较好治疗作用、符合CFS基本病机的“合谷、太冲”［4］为基础穴组，再配以CFS临床治疗中常用的“三阴交”或“足三里”［5］组成新的穴组，观察针刺各穴组对CFS小鼠的治疗效果，比较各穴组的作用差异，分析其配伍作用。
1　材料与方法
1.1　实验动物及分组
清洁级健康雄性昆明小鼠60只，4～6周龄，体重18～22 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（辽）2013-0003。饲养环境温度（24±1）℃，相对湿度（50±10）%，小鼠可自由饮水及进食。适应性饲养3 d后，按照完全随机原则将小鼠分为5组：正常组、模型组、“合谷、太冲”组、“合谷、太冲、三阴交”组、“合谷、太冲、足三里”组，每组12只。实验过程遵守国家科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.2　主要器材及试剂
小鼠游泳池　（长60 cm×宽50 cm×高35 cm）；束缚筒（根据有关文献自制［6］，采用50 m l医用注射器改装，筒壁周围用锯条锯出多条宽1mm的通气缝隙）；针灸针　（0.16×7mm，北京中研太和医疗器械有限公司）；小鼠束鼠器（北京翼诺泰科技发展有限公司）；悬尾实验架（根据有关文献自制［7-8］，将一木制横梁水平放置，两端固定，横梁距离平面30 cm，四周封闭以阻挡小鼠视线，顶端开放以利于实验观察）；小鼠旷场实验箱（根据有关文献自制［9］，长50 cm×宽50 cm×高40 cm，无上盖，内壁黑色，底面平分为25个方格）；数码摄像机（日本佳能公司）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
1.3　造模方法
采用慢性束缚+力竭游泳复合因素建立CFS动物模型［10］，造模因素每日施加1次，共12 d。上午束缚：将小鼠放入自制束缚筒内，用注射器活塞调节筒内空间大小，以小鼠呼吸不受限制又能产生束缚效果为度，束缚时间每3天循序加量1次，分别为1、1.5、2、2.5 h。下午游泳训练：将小鼠放入水温（26±2）℃的游泳池中进行游泳训练，水深30 cm，前3 d为适应性游泳，30 min/d，其后为力竭性游泳，以鼻尖沉入水中8 s不能浮出水面为力竭标准［11］。正常组不予造模，正常喂养。
1.4　针刺方法
造模完成后，将小鼠固定于束鼠器内，各针刺组分别针刺“合谷、太冲”穴，“合谷、太冲、三阴交”穴，“合谷、太冲、足三里”穴，参照《实验针灸学》［12］定位相应腧穴，双侧取穴，留针10 min，其间行针1次，施以平补平泻捻转手法，手法操作2min，1次/d，共7 d。正常组与模型组仅给予相同时间和相同方式的固定，不予针刺。
1.5　行为学观察指标
各组小鼠治疗后进行以下行为学测试。
1.5.1　悬尾实验　将鼠尾末端1 cm的部分用医用输液胶布固定在悬尾实验架的木质横梁上，使小鼠呈倒悬状态，用摄相机记录小鼠5min内的活动状态［7］，统计悬尾不动时间。
1.5.2　旷场实验　将小鼠放入旷场实验箱底面的中央格内，以四只爪子进入一格记为水平运动1分，两只前爪腾空或攀附箱壁记为垂直运动1分，用摄像机记录5 min内的小鼠行为状况，统计运动得分［9］。
1.6　血清抗氧化指标检测
行为学观察结束后，摘小鼠眼球取血，分离取上层血清，置于-20°冰箱保存备测。严格按照试剂盒说明检测血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性。
1.7　统计学方法
采用SPSS 17.0软件对数据进行分析，符合正态分布的计量数据以均数±标准差表示。采用单因素方差分析进行组间比较，用LSD和SNK法进行两两比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2　结果
2.1　实验过程中动物死亡情况
实验过程中共计死亡2只小鼠，其中　“合谷、太冲、三阴交”组与“合谷、太冲、足三里”组在造模过程中各溺亡1只。
2.2　各组小鼠悬尾不动时间、水平运动得分、垂直运动得分的比较
模型组与正常组比较，悬尾不动时间延长，水平运动、垂直运动得分减少，差异有统计学意义　（P＜0.01）。各针刺组与模型组比较，悬尾不动时间缩短，水平运动、垂直运动得分增加，差异有统计学意义（P＜0.05），其中“合谷、太冲、足三里”组差异最为明显（P＜0.01）（表1）。
表1　各组小鼠悬尾不动时间、水平运动得分、垂直运动得分的比较

 
与正常组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01
2.3　各组小鼠血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性的比较
模型组与正常组比较，血清MDA含量增加、SOD 及GSH-PX活性下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。各针刺组与模型组比较，血清MDA含量减少、SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义（P＜0.05），其中“合谷、太冲、足三里”组差异最为明显（P＜0.01）。“合谷、太冲、足三里”组与其余两针刺组比较，血清MDA含量减少，SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。
表2　各组小鼠血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性的比较

 
与正常组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与“合谷、太冲”组比较，#P＜0.05；与“合谷、太冲、三阴交”组比较，※P＜0.05
3　讨论
中医学无CFS病名，根据该病的临床表现，将其主要归属为“虚劳”“郁证”“身痛”等范畴，认为该病多由情志内伤、过劳等原因导致，基本病机为五脏功能失常，气血失和，以虚为主，虚实夹杂，病位主要在肝、脾、肾［13］。西医学对CFS病因和发病机制认识尚不充分，认为氧化应激参与了该病的病理过程，是该病的发病机制之一［14］。
悬尾实验可以评价小鼠的体力状况及情绪状态，悬尾不动时间的延长，与CFS患者躯体及心理疲劳、情绪低落的临床表现相似。旷场实验可以评价小鼠自发活动及情绪状态，旷场实验得分降低，与CFS患者精神不振、心理疲劳的临床表现相似［15］。血清MDA含量、SOD及GSH-PX活性可以反映机体的抗氧化能力［16］。实验结果提示，模型组小鼠处于心理疲劳及躯体疲劳状态，机体抗氧化能力下降，各针刺组小鼠与模型组小鼠比较，心理疲劳及躯体疲劳、机体抗氧化能力均有显著改善，其中“合谷、太冲、足三里”组小鼠改善最为显著，且该组小鼠机体抗氧化能力显著优于其余两针刺组。
“合谷”为手阳明大肠经原穴，为气分病证要穴，具有益气扶正、活血通经、行气止痛、开窍醒神、祛湿导滞、宣表达邪的作用。“太冲”为足厥阴肝经原穴和输穴，可调理肝之功能，具有疏肝解郁、调畅气机、健脑宁神、养血柔筋的作用。“三阴交”为足太阴脾经的穴位，是肝、脾、肾三阴经交会之处，为血分病证要穴，具有理脾助运、调肝益肾、养血调血、宁心安神的作用。“足三里”为足阳明胃经的合穴，是重要的补虚强壮穴，具有健脾补中、扶正培元、调理脾胃、通腑导滞的作用。“合谷、太冲”两穴同用可调阴阳、益气血、理脏腑、调升降，具有调畅气机、益气补血、通经活络的作用，可对应CFS众多的临床表现［4］。“合谷”为气病要穴，“三阴交”为血病要穴，两穴同用可起到明显的益气补血作用，“太冲”可调肝血、疏肝气，与“三阴交”同用可起到明显的养血调血、宁神解郁的作用，“合谷、太冲、三阴交”三穴同用可起到益气补血、养血宁神、行气解郁、通经活络的作用。“合谷”可益气，为阳明经腧穴，“足三里”可健运中气，亦为阳明经腧穴，两穴同用可起到明显的旺盛阳明经经气、益气补中的作用，“太冲”可疏肝而调畅气机，与“足三里”同用可起到明显的行气健中作用，“合谷、太冲、足三里”三穴同用可起到益气补中、健运脾胃、扶正培元、行气解郁、通经活络的作用。上述三组腧穴的配伍作用均可对应CFS虚实夹杂的病机，在实验中均对CFS小鼠起到了显著的治疗作用。
从配伍作用的比较来看，“合谷、太冲”补益之力弱于其余两组腧穴。“合谷、太冲、三阴交”补血养血、宁神解郁的作用较为明显，但从实验结果看，该穴组并未表现出相应的治疗优势，有待进一步观察。“合谷、太冲、足三里”益气补中、扶正培元、补益虚损的作用较佳，在实验中改善CFS小鼠心理及躯体疲劳、提高抗氧化能力的治疗优势明显，提示该穴组更适宜于CFS的治疗。
“合谷、太冲、足三里”三穴同用，具有益气补中、健运脾胃、扶正培元、行气解郁、通经活络的作用，在实验中可显著改善心理疲劳及躯体疲劳，提高抗氧化能力，其补益后天、助气血化生、调畅气机的配伍意义能更好地对应CFS以虚为主、虚实夹杂的基本病机，在临床选穴配伍时可参考应用。
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Effects of acupuncture of different acupiont groups on behaviors and antioxidant capacities in micewith chronic fatigue syndrome
ZHAIHeng ZHANG Bao-wen▲YUAN Xun
Medical College of Dalian University，Dalian 116622，China
 
［Abstract］Objective To compare the therapeutic effects of acupuncture of different acupoint groups in mice with chronic fatigue syndrome（CFS）.Methods After 3 days of adaptive feeding，60 KM malemice were randomly divided into normal group，model group，"Hegu（LI4），Taichong（LR3）"group，"Hegu（LI4），Taichong（LR3），Sanyinjiao （SP6）"group，"Hegu（LI4），Taichong（LR3），Zusanli（ST36）"group.And 12micewere in each group.CFSmodelwas established by chronic restraint and exhaustive swimming for 12 days.After 7 days of treatment，the behavioral changes of the mice were observed，and the serum antioxidant indices were detected.Results①Model group was compared with the normal group，immobility time in tail suspension test was longer；scores of horizontal movement and vertical movementwere less；serum malondialdehyde（MDA）contentwasmore；serum superoxide dismutase（SOD）activity and glutathione peroxidase（GSH-PX）activity were lower；the differences were statistically significant（P＜0.01）.②Each acupuncture group was compared with model group，immobility time in tail suspension test was shorter；scores of horizontalmovement and vertical movement were more；serum MDA content was less；serum SOD activity and GSH-PX activity were higher；the differenceswere statistically significant（P＜0.05）.The improvement of"LI4，LR3，ST36"group was the most significant（P＜0.01）.③"LI4，LR3，ST36"group was compared with other acupuncture groups，serum MDA content was less；serum SOD activity and GSH-PX activity were higher；the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Each acu point group has an obvious therapeutic effect in mice with CFS， in which，"LI4，LR3，ST36"has a better efficacy than other acupoint groups，and the effect of the combination is more in line with the basic pathogenesis of CFS.
［Keywords］Acupuncture therapy；Acupiontgroup；Chronic fatigue syndrome；Antioxidant effect
［中图分类号］R245.9
［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）09（a）-0012-04
（收稿日期：2016-05-16本文编辑：王红双）
［作者简介］翟恒（1984-），男，山东曲阜人，2014级在读硕士研究生，研究方向：中西医结合防治疾病机制的研究
▲通讯作者：张宝文（1965-），男，山东阳谷人，博士，中医药学系主任，副主任医师，研究方向：中西医结合疗效机制的研究；专业擅长：针刺手法及方剂的疗效机制；所获奖励：辽宁省中医科技进步奖三项