高效液相色谱法测定茶新那敏片中无水茶碱含量
陈 燕 孟德钢 陈翠红
浙江省绍兴市柯桥区药品检验检测中心化药室，浙江绍兴 312030
［摘要］目的 建立测定茶新那敏片中无水茶碱含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Agilent XDB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相为甲醇-0.12%戊烷磺酸钠溶液（20∶80）（用冰醋酸调节pH值至2.9±0.1），流速为1.0ml/min，检测波长为254nm。结果 无水茶碱进样量在0.3202～1.2808μg范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为101.4%，RSD为1.3%（n=9）。结论HPLC法简便、准确，可作为茶新那敏片质量控制方法。
［关键词］茶新那敏片；无水茶碱；高效液相色谱法；色谱柱
茶新那敏片由氨茶碱（以无水茶碱计）、盐酸溴己新和马来酸氯苯那敏组成，用于缓解支气管哮喘、喘息型支气管炎、阻塞性肺气肿等的喘息症状［1-4］。在国家药品标准WS-10001-（HD-0336）-2002中，其主要成分无水茶碱的含量测定采用紫外分光光度法，该法操作繁琐，且药品主成分相对复杂，容易产生干扰［5-7］。氨茶碱原料药目前已在2015年版《中国药典》二部收载，且无水茶碱的含量测定采用高效液相色谱（HPLC）法［7］。为此，本文采用HPLC法对茶新那敏片中的无水茶碱进行了含量测定，结果方法可靠、重现性好、简单易行。
1 样品来源、仪器及试剂
1.1 样品来源
茶碱对照品（供含量测定用，按C7H8N4O2计，含量为100.0%；使用前不需干燥处理）；可可碱对照品（供检查用，供HPLC法测定用，按C7H8N4O2计，本品含量为100.0%；使用前不需干燥处理）；马来酸氯苯那敏对照品（供含量测定用，按C16H19ClN2·C4H4O4计，本品含量为99.7%；105℃干燥3 h后使用）；盐酸溴己新对照品 （供含量测定用，供HPLC法测定用，按C14H20Br2N2·HCl计，含量为99.9%；105℃干燥2 h后使用）；以上对照品均来源于中检所。茶新那敏片（立业制药股份有限公司，批号201504212、201512221、201512212，规格：复方）。
1.2 仪器
Agilent 1260高效液相色谱仪；Agilent 1260 DAD检测器；梅特勒-托利多XS205DU微量电子天平；梅特勒FE20K酸度计；KQ-500E超声波清洗器（昆山超声仪器）。
1.3 试剂
纯化水（自制）；甲醇（色谱纯，天津四友，批号151020）；戊烷磺酸钠（离子对试剂，国药集团化学试剂有限公司，批号20140312）；冰醋酸（分析纯，杭州化学试剂有限公司，批号20130513）。
2 试验和结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱 （4.6 mm× 150 mm，5μm）；流动相：甲醇-0.12%戊烷磺酸钠溶液（20∶80）（用冰醋酸调节pH值至2.9±0.1）；柱温：35℃；流速：1.0m l/min；检测波长：254 nm；进样量：10μl。
2.2 系统适用性试验
取茶碱对照品与可可碱对照品各适量，加甲醇-水（1∶4）溶解并稀释制成每1毫升中各含0.064mg的溶液，理论板数按茶碱峰计算≥2000，茶碱峰和可可碱峰之间的分离度应＞3.0。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取茶碱对照品适量，加甲醇-水 （1∶4）溶解并稀释制成每1毫升中各含0.08 mg的溶液，作为茶碱对照品溶液。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氨茶碱20mg），置200ml量瓶中，加甲醇-水（1∶4）溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为茶碱供试品溶液。
2.3.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例配成不含氨茶碱的阴性对照样品，按照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.4 干扰试验
按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪。结果茶碱保留时间为4.980min，样品色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应保留时间处，有相同色谱峰，而阴性对照溶液在此处无干扰，色谱图见图1。
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图1 干扰试验HPLC色谱图
2.5 线性关系考察
精密称取茶碱对照品16.01 mg，加甲醇-水（1∶4）溶解并稀释制成每1毫升中各含0.16 mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取该贮备液2、4、5、6、8 ml分别置10ml量瓶中，加甲醇-水（1∶4）稀释至刻度，各进样10μl，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，进行回归分析，得回归方程为Y=14.934X+10.146（r=1.0000）。结果表明茶碱在32.02～128.08μg/ml范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
取干扰试验项下对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，连续进样6次，RSD为0.04%（n=6），结果表明方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
取干扰试验项下供试品溶液，在室温条件下放置，分别于0、2、4、6 h时取10μl按上述色谱条件测定，结果表明供试品溶液在6 h内稳定性良好，峰面积的RSD为0.2%。
2.8 重复性试验
精密称取茶碱对照品2份，加甲醇-水（1∶4）溶解并稀释制成每1毫升中含0.08 mg的溶液，作为茶碱对照品溶液。再取同一批号样品（201504212）6份，按供试溶液制备方法制备，测定，结果无水茶碱的平均含量为56.5mg/片，其RSD为0.2%。
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品细粉适量，按“2.3.2”项下制备供试品溶液1份。精密量取9份该供试品溶液各5ml，在3份中精密加入2.5试验项下的对照品贮备溶液各1.5ml，另3份中精密加入该贮备液各2.5ml，剩下3份各加入3.5 ml，混匀后用甲醇-水（1∶4）定容至10ml。在上述色谱条件下依法测定，计算回收率，得平均回收率为101.4%（n=9），RSD为1.3%（表1）。
表1 加样回收率试验数据
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2.10 样品含量测定
取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别进样10μl，记录色谱图，按外标法计算含量，结果批号为 201504212、201512221、201512212的三批样品中无水茶碱含量分别为 56.9、56.7、57.3mg/片。
3 讨论
参考2015年版《中国药典》二部中氨茶碱原料药项下无水茶碱的测定方法，以甲醇-水（1∶4）为溶剂，254 nm为检测波长，甲醇-0.12%戊烷磺酸钠溶液（20∶80）（用冰醋酸调节pH值至2.9±0.1）为流动相，在此系统下样品中其他成分对无水茶碱测定无干扰［8］。考察了甲醇-0.12%戊烷磺酸钠溶液 （20∶80）（用冰醋酸分别调节pH值至3.0、2.9、2.8）三种流动相，比较了资生堂XBridge C18、安捷伦Eclipse XDB-C18和安捷伦Zorbax SB-C18长短三根色谱柱。结果表明，流动相2.9±0.1的pH值和不同色谱柱型号对系统溶液分离度并无影响。本方法与紫外分光光度法相比专属性强、灵敏度高，准确度和重复性好，操作简便［9-15］，可以作为控制茶新那敏片中无水茶碱含量的有效手段。
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Content determination of anhydrous theophylline in aminophylline bromhexine and chlorphenamine tablets by HPLC
CHEN Yan MENG De-gang CHEN Cui-hong
Chemical Chamber，Keqiao District Drug Inspection and Testing Center of Shaoxing City in Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China
Chemical Chamber，Keqiao District Drug Inspection and Testing Center of Shaoxing City in Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China
［Abstract］Objective To establish a HPLCmethod for the content determination of anhydrous theophylline in aminophylline bromhexine and chlorphenamine tablets.Methods The determination was performed on Agilent XDB-C18column （4.6mm×150mm，5μm）with themobile phase consisted ofmethanol-0.12%sodium pentanesulfonate solution（20∶80，pH was adjusted to 2.9±0.1 with acetic acid）.The flow rate was 1.0 ml/min.The detection wavelength was 254 nm.Results The method showed a good linear relationship for anhydrous theophylline within the range of 0.3202～1.2808μg，the mean recovery ratewas 101.4%with RSD of 1.3% （n=9）.Conclusion Themethod is simple，accurate.It can be used for quality control of aminophylline bromhexine and chlorphenamine tablets.
［Key words］Aminophylline bromhexine and chlorphenamine tablets；Anhydrous theophylline；HPLC；Chromatographic column
［中图分类号］R927.2［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）08（c）-0127-03
（收稿日期：2016-05-28本文编辑：方菊花）
［作者简介］陈燕（1982-），女，汉族，浙江绍兴人，本科，药学中级，研究方向：药品检验