栀制人参炮制前后田七素含量变化
孙媛媛1 贾天柱2▲
1.辽宁省本溪市药品检验所，辽宁本溪 117000；2.辽宁中医药大学大连校区，大连 116600
［摘要］目的 测定栀制人参炮制前后田七素的含量变化。方法 采用高效液相色谱法测定栀制人参炮制前后田七素的含量变化。结果 人参生品中田七素含量为2.1‰，红参中为0.9‰，人参栀制品为0.5‰。与人参生品比较，红参降低了57%，人参栀制品降低76%。结论人参经栀制后降低了人参中的副反应成分田七素的含量。
［关键词］人参；栀子；炮制品；田七素
人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智的作用［1］，但是其毕竟属于药物，具有燥性，并非人人皆适宜，长期服用易导致人参中毒，出现欣快、烦躁、激动、失眠、过敏及“人参滥用综合征”等副反应［2-3］。在徐灵胎制药论中曾经提到或以相资为制，或以相恶为制，或以相畏为制，或以相喜为制来降低某些药物的副作用及不良反应，使其更好地发挥治疗作用。根据“相反为制”的制药理论，在人参炮制过程中，选用栀子为新辅料，以其苦寒之性制约人参燥性。为进一步验证炮制工艺的合理性，本研究通过查阅大量文献，寻找导致人参副作用的化学成分，比较其炮制前后的含量变化。小菅卓夫等从三七中分离得到一种具有止血作用的活性物质—田七素。研究发现，在人参中也含有田七素成分，其具有一定的神经毒副作用，易导致心慌、气短、恐惧、烦躁等副反应［4-8］，故被认为是导致人参副反应的成分之一。本研究以田七素为测定指标，考察其在人参栀制前后的含量变化，进而验证炮制工艺的合理性。
1 仪器与试药
1.1 仪器设备
高效液相色谱仪（型号：Agilent1100，检测器：UV，生产厂家：安捷伦科技有限公司）；粉碎机（型号：Fw 80）；天平（型号：FA1004 B，AE240，生产厂家：上海精密科学仪器有限公司，瑞士梅特勒），干燥箱（型号：101，生产厂家：北京市永光明仪器厂）；水浴锅（生产厂家：北京市长风仪器仪表公司）；超声波清洗器（型号：KQ-250 DB，生产厂家：昆山市超声仪器有限公司）；PH试纸。
1.2 试药
①栀子：购买自安徽省亳州市药材公司，根据《中国药典》2005年版一部鉴定为正品。②蜂蜜：产自河北省肃宁梦圆蜂蜜厂。③人参：产自辽宁省本溪市桓仁县，根据《中国药典》2005年版一部鉴定为正品。④试剂：磷酸二氢钠；四丁基氢氧化胺等试剂均为分析纯，天津科密欧色谱级甲醇；娃哈哈纯净水。⑤田七素对照品：纯度为97%，由四川大学华西药学院药物化学教研室提供。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 对照品溶液的制备 取田七素对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.11mg/ml的溶液，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取过60目筛的人参生品、栀制品及红参粉末0.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，加70%甲醇溶液25 ml，超声波提取1 h后，离心15 min（3500 r/min），取上清液，再提取滤渣两次，合并上清液，蒸干，用70%的甲醇溶液转移置10 ml量瓶中并溶解稀释至刻度，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.1.3 色谱条件 高效液相色谱柱：迪马C18（4.6 mm× 250mm，5μm）；流动相比例：甲醇—含3.5mmol/L磷酸二氢钠和0.03%四丁基氢氧化胺溶液（3∶97，用磷酸调节pH至3.8）；检测波长：220 nm；柱温：30℃；流速：1ml/min。
2.1.4 测定法 精密吸取供试品和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。结果以千分含量计，采用外标法计算含量。
2.2 结果
2.2.1 线性范围考察 精密吸取对照品溶液 2、6、8、12、16、20μl注入液相色谱仪，按 “2.1.4测定法”测定，结果见表1。
表1 线性范围考察
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以纵坐标为峰面积，横坐标为进样量，建立标准曲线，线性回归方程见图1，r=0.9998；当进样量为0.22～2.21μg时，田七素在此范围内线性关系良好。
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图1 线性范围图
2.2.2 精密度考察 取供试品溶液，精密吸取20μl，连续进样6次，按“2.1.4 测定法”测定，结果为 RSD= 1.06%＜2.00%，表明精密度符合规定（表2）。
表2 精密度考察
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2.2.3 稳定性考察 取供试品溶液，精密吸取20μl，每隔0、2、4、6、8、10 h间隔进样，按“2.1.4测定法”测定，结果为RSD=1.82%＜2.00%，测定结果稳定，表明供试品在制备后的10 h内，田七素的化学性质稳定（表3）。
表3 稳定性考察
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2.2.4 重现性考察 取同一批供试样品溶液6份，按“2.1.4测定法”测定，结果为RSD=1.94%＜2.00%，表明重现性良好（表4）。
表4 重现性考察
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2.2.5 加样回收率 取已知含量的人参生品粉末0.25 g，精密称定6份，分别置锥形瓶中。另取对照品适量，精密称定，用水溶解制成每1ml含40mg的溶液，分别精密量取1.2ml置上述锥形瓶中，按“2.1.2”制备供试品溶液。按“2.1.4测定法”测定含量，结果为RSD= 1.60%＜2.00%，表明方法准确可靠，符合规定（表5）。
表5 加样回收率
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2.2.6 含量测定结果 取人参生品、人参栀制品及红参粉末0.5 g，精密称定，按“2.1.2”制备供试品溶液，按“2.1.4测定法”测定含量，高效液相色谱图见图2～图5。含量测定结果为人参生品为 2.1‰，红参中为0.9‰，人参栀制品为0.5‰。与人参生品比较，栀制人参中降低76%，红参降低了57%（表6）。
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图2 田七素对照品
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图3 人参生品
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图4 红参
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图5 栀制人参
表6 含量测定结果（‰）
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3 讨论
自古以来人参就被人们作为补益佳品用于强身健体、益气延年，而其不良反应往往被忽视。通过文献报道可知，导致人参不良反应的主要原因是用法、用量不当，主要分为变态反应和毒性反应。变态反应症状为皮肤发红、瘙痒、起红色丘疹等［9-10］。毒性反应症状主要表现在消化系统、心血管系统和神经系统。消化系统症状为易出现恶心、呕吐、顽固性呃逆及腹胀痛等；心血管系统为易诱发高血压、心律失常等；神经系统为易出现烦躁、发热、多汗、失眠、神志不清等［11-14］。栀制人参以传统炮制理论为基础，在保留人参补益作用的同时，能够制约人参的燥性，降低人参的毒副作用，最终可以达到扩大人参应用范围的目的。
田七素最早是从三七中分离得到的一种化学成分，具有止血活性作用。后经发现在人参、高丽参、西洋参中也含有此种成分。根据文献研究［15-17］，田七素不仅具有止血作用，还对神经系统有一定毒性作用。当田七素浓度较高时，可使小鼠神经胶质细胞发生形态学改变，发生细胞溶解反应。田七素还可以影响线粒体的功能，导致神经元进行性变性坏死。赵日秋等［18-19］的研究发现，小剂量田七素对神经系统作用不明显，中剂量表现为短时的兴奋作用，大剂量表现为明显的兴奋作用。本次试验以田七素为副作用成分，分别测定人参生品、红参及人参栀制品中田七素的含量，测定结果显示，与人参生品比较，红参和栀制人参中田七素含量均降低。根据文献研究，田七素对热不稳定，在脱水、加热、干燥等条件下极易裂解，发生脱羧降解反应，主要原是由于其具有二元酸结构特点，经干热处理后含量会降低［20］。红参和栀制人参的炮制工艺中均需高温蒸制，这是田七素含量降低的主要原因，但栀制人参中田七素的含量下降更明显，主要原因为两者炮制工艺并不完全相同，因此，人参的栀制工艺使人参中产生不良反应的成分—田七素含量大大降低，进而说明栀制人参炮制工艺的合理性。
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Contents change of dencichine before and after Ginseng processed with Gardenia
SUN Yuan-yuan1JIA Tian-zhu2▲
1.Medicine Institute of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China；2.Dalian Campus，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China
1.Medicine Institute of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China；2.Dalian Campus，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China
［Abstract］Objective to determine the contents of dencichine before and after Ginseng processed with Gardenia.Methods The contents change of dencichine before and after Ginseng processed with Gardenia was determined by HPLC. Results The contents of dencichine of Ginseng raw product was 2.1‰，red Ginseng was 0.9‰，Ginseng processed with Gardenia was 0.5‰.Compared with Ginseng raw product，the contents of dencichine of red Ginseng reduced 57%，Ginseng processed with Gardenia reduced 76%.Conclusion After Ginseng processed with Gardenia，the contents of dencichine reduce.
［Key words］Ginseng；Gardenia；Processed product；Dencichine
［中图分类号］R927.2［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）08（b）-0012-04
（收稿日期：2016-04-07本文编辑：祁海文）
［作者简介］孙媛媛（1983-），女，硕士，研究方向：中药炮制
▲通讯作者