鲁　艺　肖丽和　杜晓娟　宋　茜　王淑红　王　平　王铁杰▲

深圳市药品检验研究院，深圳518057

［摘要］目的探讨六味补血胶囊的16组拆方对血虚小鼠造血功能的影响。方法将健康NIH雄性小鼠190只随机分为19组，分为阳性组、空白组、模型组、拆方组（拆方1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16组），每组10只。腹腔注射环磷酰胺制作化学药物诱发血虚证小鼠模型。阳性组给予复方阿胶浆，每次0.3 m1/20 g；空白组和模型组给予生理盐水，每次0.3 m1/20 g；拆方1～16组小鼠按相应配伍剂量连续灌胃28 d，1次/d，每次0.3 m1/20 g。观察各组对血虚小鼠外周血象等指标的影响。结果血红蛋白、红细胞、网织红细胞各指标模型组均值低于空白组，（P＜0.01），模型组与空白组有显著差异，表明造模成功，全方组（拆方16组）高于其他拆方组和阳性组。结论六味补血胶囊对环磷酰胺造成的血虚小鼠造血功能改善明显，其配伍具有合理性。

［关键词］六味补血胶囊；外周血象；血虚小鼠；环磷酰胺

六味补血胶囊为深圳国源国药有限公司独家研制成功并具有国药准字号的补血类专利产品，临床疗效确切，特别适用于女性气血两虚，症见头晕眼花、神疲乏力、唇甲色淡等。六味补血胶囊以补血养血为主的四物汤为基础方剂，并辅以具补气圣药之称的黄芪和凉血止血的紫草，致全方配伍具气血双补、养血活血的疗效。本实验从六味补血胶囊君、臣、佐、使配伍关系出发，以君药当归为核心，依次配伍熟地黄、白芍、川芎、黄芪、紫草等5味中药，进行拆方设计，得到六味补血胶囊的不同组方并建立与中医临床接近的血虚动物模型，以六味补血胶囊不同组方为研究对象，研究不同组方对环磷酰胺（CTX）所致血虚动物模型造血功能的影响。

1.1　实验动物

健康NIH雄性小鼠（SPF级）190只，体重（18.0± 2.0）g，购自广东省医学实验动物中心（动物质量合格证：44007200025367）。

1.1.2　实验药品及试剂复方阿胶浆（批号：1309029，购自山东东阿阿胶股份有限公司），环磷酰胺片（批号150301，购自通化茂祥制药有限公司），六味补血胶囊的16组拆方由深圳国源国药有限公司制备及提供。1.1.3主要仪器XT-2000i血细胞分析仪［希森美康医用电子（上海）有限公司］，KJMR-ⅡA血液混合器（江苏正基仪器有限公司），RQ/ZC K2E真空采血管（广州阳浦医疗科技股份有限公司）。

1.2　实验方法

1.2.1　实验分组将实验动物随机分为19组，每组10只，分为阳性组、空白组、模型组、拆方组（拆方1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16组）（表1）。

表1　六味补血胶囊拆方信息

1.2.2　动物模型制备参照文献［1］腹腔注射环磷酰胺制作化学药物诱发血虚证模型。NIH小鼠适应性饲养1周后，除空白组外，模型组、阳性组、拆方1～16组小鼠在给药第5～8天、第13～16天、第22～25天腹腔注射环磷酰胺（100 mg/kg）0.4 m1/20 g。

1.2.3　药物制备当归用10倍量70%乙醇溶液回流提取2次，每次2 h，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液静置24 h，浓缩至浸膏备用；当归药渣用10倍量水回流2次，每次1 h，合并提取液，滤过，浓缩成浸膏与上述当归浸膏合并，减压干燥后，制粒，干燥，制成1000粒，即得拆方1组。以上六味，当归参照拆方1组制得，当归药渣与表1中拆方2～16组中熟地黄、白芍、川芎、黄芪、紫草的不同组方配伍，用10倍量水回流2次，每次1 h，合并提取液，滤过，浓缩成浸膏与上述当归浸膏合并，减压干燥后，制粒，干燥，拆方组各制成1000粒，即得拆方2～16组。

1.2.4　给药方法六味补血胶囊原处方成人口服量15粒/d（0.48 g/粒），拆方1～16组按照表1组方配伍小鼠连续灌胃28 d，1次/d，每次0.3 m1/20 g（拆方1组按4.29 g/kg，拆方2组按6.55 g/kg，拆方3组按5.43 g/kg，拆方4组按6.10 g/kg，拆方5组按8.70 g/kg，拆方6组按12.79 g/kg，拆方7组按10.46 g/kg，拆方8组按12.30g/kg，拆方9组按6.30g/kg，拆方10组按11.16g/kg，拆方11组按8.42 g/kg，拆方12组按13.04 g/kg，拆方13组按18.73 g/kg，拆方14组按14.74 g/kg，拆方15组按14.51 g/kg，拆方16组按13.74 g/kg给药，小鼠耐受量按照25倍计即小鼠每日给药量需60 mg/20 g［2］）；空白组和模型组给予生理盐水，每次0.3 m1/20 g；阳性组给予复方阿胶浆，每次0.3 m1/20 g。

1.3　检测指标

19组小鼠于给药后12 h，随机取各组小鼠，腹主动脉取血，用抗凝采血管取血1 m1，用血细胞分析仪自动检测血红蛋白、红细胞、网织红细胞。

1.4　统计学处理

采用SPSS 16.0 one-way ANOVA进行统计学处理。

六味补血胶囊的16组拆方对血虚小鼠外周血象的影响如下。

模型组血红蛋白、红细胞、网织红细胞各指标模型组均值低于空白组（P＜0.01），表明造模成功，方法可行。

血红蛋白的值：拆方16组＞14组＞15组＞8、9组＞5组＞11组、12组＞15组＞13组与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；其中拆方14、15、16组的值高于阳性组；与拆方16组比较，拆方1～15组中除拆方14组外差异均有统计学意义（P＜0.05）。

红细胞的值：16组＞11组＞8组＞15组＞12组＞14组＞13组，与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；8、11、12、14、15、16组值高于阳性组；与拆方16组比较，拆方1～15组中除拆方8、9、11、14、15组外差异均有统计学意义（P＜0.05）。

网织红细胞指标的值：10组＞11组＞16组＞9组＞6组＞12组＞8组，与模型组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；9、10、11、16组值高于阳性组；与拆方16组比较，拆方1～15组中除拆方9、10、11组外差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表2　六味补血胶囊的16组拆方对血虚小鼠外周血象的影响（x±s，n=10）

 

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与全方组（16组）比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与阳性组比较，▲P＜0.05

根据表2各指标的值可见，全方组（拆方16组）有明显升高血虚小鼠外周血中血红蛋白、红细胞、网织红细胞的作用（P＜0.05或P＜0.01），其升高网织红细胞的作用不如拆方10组与拆方11组，但是从总体疗效综合分析全方组作用更全面，并且不同指标的各拆方组与全方组差异均有统计学意义，表明全方组配伍合理，疗效显著。

本实验采用环磷酰胺制备血虚动物模型，环磷酰胺作为细胞毒制剂其主要功能使免疫器官萎缩，抑制造血系统，降低血细胞生成，这种模型具有简单可行，用量及时间可以灵活掌握的优点。本课题组通过反复预实验证明六味补血胶囊延长给药时间后，补血效果更明显，但相关文献［3］表明环磷酰胺降低外周血象指标持续时间较短，模型动物外周血象容易自然恢复，甚至出现反跳现象。因此，本课题组在相关文献［1，4-6］基础上，对造模方法进行改进，采用间隔造模法即28 d试验过程中第5～8天、第13～16天、第22～25天腹腔注射环磷酰胺。此种造模方法由延长给药时间而引起单次造模致外周血象变化不明显，同时在最后一次给药后的第3天取血也是外周血象变化较明显的时间点。

中医理论角度［7-9］，血虚证即血液、津液亏损，临床常见面色苍黄、毛发枯落、头昏、无力、舌淡苔白、妇人经期量少，与现代医学的贫血症状较为类似，但也有差异。研究［10-12］表明，制备血虚模型通常是使机体造血功能下降或者抑制动物骨髓，进而降低外周血细胞的产生。红细胞、网织红细胞等现代指标均可代表机体的造血功能，同时血红蛋白的主要功能是为全身运输氧气，在临床中血红蛋白作为考察贫血的主要指标，这为本实验选择红细胞、网织红细胞、血红蛋白三个指标提供了理论依据［13］。研究［14］表明，黄芪能够促进血细胞生成、发育、成熟，增加细胞内cAMP含量并促进骨髓细胞的生长分化；紫草具有抗凝血、止血的作用［15］。从结果可知，血红蛋白、红细胞、网织红细胞的值在配伍黄芪、紫草后的16组高于以四物汤配伍的12组。

本试验阳性组用药选择复方阿胶浆，由于其临床上明确的补气补血疗效，可以衡量拆方1～16组的治疗效果，使之具有公认性、可信性以及便于结果分析。拆方1～5组，以当归为核心分别从熟地黄、白芍、川芎、芪草（黄芪、紫草）中分别选一味药组方，5组中外周血象值低于阳性组，与模型组、全方组比较差异无统计学意义；拆方6～11组以当归为核心，分别从熟地黄、白芍、川芎、芪草（黄芪紫草）中分别选二味药组方，拆方9组（当归、白芍、川芎）和拆方11组（当归、川芎、黄芪、紫草）与模型组比较差异有统计意义；从全方组中去除一味药得到拆方12～15组，拆方12、14、15组与全方组、模型组比较，差异有统计学意义，红细胞、网织红细胞、血红蛋白值与拆方1～11组比较，升高。本课题组通过多组拆方药效实验可以证明六味补血胶囊全方配伍的合理性、可行性。

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Impact of 16 demolition groups of six kinds of Buxue capsule on hematopoietic function of blood deficiency mice resulted from cyclophosphamide

LU YiXIAO Li-heDU Xiao-juanSONG QianWANG Shu-hongWANG PingWANG Tie-jie▲
Shenzhen City Institute of drug testing，Shenzhen518057，China

［Abstract］Objective To exp1ore the impact of 16 demo1ition groups of six kinds of Buxue capsu1e on hematopoietic function of b1ood deficiency mice.Methods 190 hea1th NIH ma1e mice were divided into nineteen groups，name1y positive group，b1ack group，mode group，demo1ition groups（inc1uding demo1ition group 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16），with each group 10 mice.Intraperitonea1 injection cyc1ophosphamide was used to dup1icate b1ood deficiency mice mode1.Positive group was given compound E Jiao Jiang（0.3 m1/20 g each time）；B1ank group and mode1 group was given norma1 sa1ine（0.3 m1/20 g each time）；The rest of the 16 groups according to the corresponding dose 1avage 28 days（1 time/d，0.3 m1/20 g each time）.The impact of each group on the periphera1 b1ood indicators of b1ood deficiency mice was observed.Results The mean va1ue of hemog1obin，red b1ood ce11 and reticu1ated red b1ood ce11 in mode group were 1ower than those in b1ack group（P＜0.01），and the difference between mode group and b1ack group was obvious，which showed that the mode1 was successfu1；The who1e prescription group（demo1ition group 16）was higher than other demo-1ition groups and positive group.Conclusion Six kinds of Buxue capsu1e has obvious improvement in hematopoietic function of b1ood deficiency mice that resu1ted from cyc1ophosphamide，which compatibi1ity of medicines is rationa1.

［Key words］Six kinds of Buxue capsu1e；Periphera1 b1ood；B1ood deficiency mice；Cyc1ophosphamide

［中图分类号］R932

［文献标识码］A

［文章编号］1674-4721（2016）06（c）-0012-04

［基金项目］广东省深圳市科技计划项目（JCYJ 20140722104 416530）

［作者简介］鲁艺（1963-），男，硕士，副主任药师

通讯作者：▲王铁杰（1965-），女，博士，主任药师

收稿日期：（2016-03-12　本文编辑：方菊花）