EV71感染手足口病患儿细胞免疫及体液免疫功能变化研究
赖茂 倪 明
广东省东莞市儿童医院儿科 广东省东莞市儿科研究所，广东东莞 523325
广东省东莞市儿童医院儿科 广东省东莞市儿科研究所，广东东莞 523325
［摘要］目的 研究EV71感染手足口病患儿细胞免疫及体液免疫功能的临床变化特点。方法 随机选取2014年1月～2015年6月医院收诊的60例EV71感染手足口病患儿，按照《手足口病诊疗指南（2010版）》将患儿分为轻型（A组）和重型（B组），再随机选取2014年1月～2015年6月至医院体检的30例正常儿童作为对照组（C组），观察比较三组静脉血淋巴细胞（Th细胞、Ts细胞、B细胞）、血清炎性介质（TNF-α、IL-6、IL-10）、血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及补体（C3、C4）表达水平。结果 ①静脉血淋巴细胞表达水平：A、B两组的Th细胞、Ts细胞表达水平显著低于C组，B细胞表达水平高于C组，差异有统计学意义（P＜0.05）；②血清炎性介质表达水平：A、B两组的TNF-α、IL-6、IL-10表达水平显著高于C组，且B组显著高于A组（P＜0.05）；③血清免疫球蛋白水平及补体水平：A、B两组的IgA、IgG水平高于C组，且B组显著高于A组（P＜0.05）；三组的IgM水平比较差异无统计学意义；A、B两组的C3、C4水平显著高于C组，且B组显著高于A组（P＜0.05）。结论EV71感染手足口病患儿呈细胞及体液免疫功能异常表现，且与患儿的病情有一定的相关性，检测相关血清指标有助于提高临床预后评估质量。
［关键词］EV71病毒；手足口病；细胞免疫；体液免疫
手足口病是一种临床常见的传染性疾病，主要由肠道萨科奇病毒及EV71病毒感染而导致的，且该病具有较强的传染性，在我国各个区域都有出现［1］。EV71感染后，病毒繁殖迅速导致出现病毒血症，对患儿组织及器官都有一定的影响，可能引发患儿出现多器官功能障碍，甚至出现功能衰竭等严重并发症状［2-3］。该病主要出现于手、足、口等部位的黏膜中及组织受压位置，病毒聚集、繁殖从而导致局部组织出现病变［4］。随着临床医学对手足口病的深入研究，发现病毒感染引起患儿机体内的细胞免疫及体液免疫在疾病进展以及组织损伤中发挥了一定的作用［5］。文章主要就EV71感染手足口病患儿细胞免疫及体液免疫功能的临床变化特点展开研究。
1 资料与方法
1.1一般资料
随机选取2014年1月～2015年6月医院收诊的60例EV71感染手足口病患儿，按照《手足口病诊疗指南（2010版）》［6］将患儿分为轻型（A组）和重型（B组），其中A组36例、B组24例；随机选取2014年1月～2015年6月至医院体检正常的30例儿童作为对照组（C组）。所有患儿均经PCR核酸检验证实为EV71病毒感染［7］。A组36例患儿中男16例、女20例；年龄1～6岁，平均（3.4±0.6）岁；病程2～7 d，平均（3.1±1.0）d。B组24例患儿中男13例、女11例；年龄0.7～7岁，平均（3.6±0.5）岁；病程1～6 d，平均（3.6±1.1）d。C组30名儿童中男16例、女14例；年龄0.8～6岁，平均（3.5±0.3）岁。本次研究观察排除应用免疫抑制剂、结核性疾病、其他病毒感染疾病及免疫性疾病患儿。
1.2方法
1.2.1静脉血淋巴细胞检测方法 清晨空腹取血2 ml，加入淋巴细胞分离液后震荡，离心淋巴细胞，将淋巴细胞放入PBS缓冲液后进行上机检验。
1.2.2血清炎性介质检测方法 清晨空腹取血2 ml，离心血清后低温保存，并采用蒸馏水为空白对照，采用TNF-α、IL-10及IL-6检测试剂盒进行检验。
1.2.3血清免疫球蛋白水平及补体检验方法 清晨空腹取血2 ml，离心血清后低温保存，并依次加入一抗及二抗后室温孵育，采用IgA、IgG、IgM、C3、C4检测试剂盒进行检验。
1.3观察指标
观察三组患者静脉血淋巴细胞（Th细胞、Ts细胞、B细胞）、血清炎性介质（THF-α、IL-6、IL-10）、血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及补体（C3、C4）的表达水平。分别应用血液检测仪、比色法及放射免疫法进行检测［8-10］。
1.4统计学方法
采用SPSS 16.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差
表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1三组患者静脉血淋巴细胞表达水平的比较
A组患者的Th细胞表达水平显著低于C组（P＜0.05）；B组患者的Th细胞、Ts细胞表达水平显著低于C组（P＜0.05），B细胞表达水平高于C组（P＜0.05）；B组患者的Th细胞、Ts细胞表达水平显著低于A组（P＜0.05），B细胞表达水平高于A组（P＜0.05）（表1）。
表1 三组患者静脉血淋巴细胞表达水平的比较（%，
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与C组比较，aP＜0.05；与A组比较，bP＜0.05
2.2三组患者血清炎性介质表达水平的比较
A、B两组患者的TNF-α、IL-6、IL-10表达水平显著高于C组，且B组显著高于A组（P＜0.05）（表2）。
表2 三组患者血清炎性介质表达水平的比较（pg/L，）
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与C组比较，aP＜0.05；与A组比较，bP＜0.05
2.3三组血清免疫球蛋白水平及补体水平的比较
A、B两组患者的IgA、IgG水平明显高于C组，且B组显著高于A组（P＜0.05）；三组在IgM方面比较差异无统计学意义；A、B两组在C3、C4水平方面显著高于C组，且B组高于A组（P＜0.05）（表3）。
表3 三组患者血清免疫球蛋白水平及补体水平的比较（g/L，）
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与C组比较，aP＜0.05；与A组比较，bP＜0.05
3 讨论
手足口病是一种常见的儿科传染性疾病，该病发病隐匿、传染迅速，且多种肠道病毒都可导致儿童患有手足口病，除了典型的皮肤疱疹及神经系统症状外，呈现多器官影响的特点，如心肌损伤等，重型患儿的生存率较低［11-12］。相关文献［13］研究指出，手足口病患儿存在免疫因子及炎性因子表达异常的现象。因此，可以得出结论：免疫细胞及炎性因子参与了手足口病的发作及进展。相关学者指出，手足口病患儿Th细胞出现免疫漂移现象，Th1向Th2细胞转变从而产生了免疫抑制效果，其同时也是促进手足口病发展的重要机制之一［14］。健康人体中的Th1/Th2细胞处于动态平衡状态，两者之间的免疫应答存在交互负反馈现象［15］。Th1细胞因子增长或Th2细胞因子降低都会导致免疫细胞对念珠菌的抑制效果受到影响。Th1细胞因子能够通过激活巨噬细胞及中性粒细胞从而提高免疫功能；Th2细胞因子则能通过抑制Th1细胞因子的介导作用提高机体对致病菌的易感性［16］。
相关研究［17］指出，EV71感染手足口病患儿存在细胞免疫以及体液免疫异常的现象，患儿Th细胞以及Ts细胞表达下降，而B细胞上升，与本次研究调查结果一致。Th细胞具有激活免疫细胞及介导的作用，是维持人体免疫细胞系统正常运作的重要调节机制之一；Ts细胞能够激活Th细胞及B细胞，从而发挥免疫调节机制，Th细胞及Ts细胞表达能够反映患者的免疫状况，Th细胞及Ts细胞下降能反映患者免疫能力受到抑制，且与患者的病情有一定的关联［18］。
本研究观察发现，患儿TNF-α、IL-6、IL-10表达水平较高。TNF-α、IL-6、IL-10是被激活的免疫细胞所释放的介质，TNF-α、IL-6能够导致机体产生较强烈的炎症反应，且能够导致组织、器官损伤，甚至出现功能衰弱和组织损坏等严重后果；同时，TNF-α、IL-6对中性粒细胞等炎性细胞具有介导及激活的效果，能够激活炎性细胞产生炎症反应。IL-10能够调节T细胞免疫功能，该细胞的异常表达表明患儿体内出现细胞免疫异常［19］。IgA、IgG对巨噬细胞及免疫细胞功能具有增强的效果，IgA能够通过经典途径提高机体免疫功能［20］。补体C3、C4是肽类分子的一种，其能够通过免疫细胞的激活，参与机体的非特异性免疫。
文章通过分析发现，EV71感染手足口病患儿Th细胞、Ts细胞表达水平显著低于正常儿童，B细胞表达高于正常儿童；TNF-α、IL-6、IL-10表达水平显著高于正常儿童；IgA、IgG水平高于正常儿童；且IgM水平比较差异无统计学意义；C3、C4水平显著高于正常儿童。说明EV71感染手足口病患儿呈现细胞及体液免疫功能异常表现，与患儿的病情呈一定的相关性，具有重要的现实意义。
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Study the changes of cellular immunity and humoral immune function in children with hand-foot-mouth disease in EV71
LAI Mao NI Ming
Department of Paediatrics，Children′s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province Institute of Pediatrics Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523325，China
Department of Paediatrics，Children′s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province Institute of Pediatrics Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523325，China
［Abstract］Objective To study the changes of cellular immunity and humoral immune function in children with handfoot-mouth disease in EV71.Methods 60 hand-foot-mouth disease children with EV71 infection who received diagnostic hospital from January 2014 to June 2015 were randomly selected and divided into light（group A）and heavy （group B）according to"Hand-foot-mouth disease diagnosis and treatment guidelines （2010 version）"，and then 30 healthy children to the hospital for medical examination from January 2014 to June 2015 were randomly selected as control group（group C）.The three sets of blood lymphocytes（Th cells，Ts cells，B cells），expression the level of serum inflammatory mediators（TNF-α，IL-6，IL-10）expression levels，differences in serum immunoglobulins（IgA，IgG，IgM）and complement levels（C3，C4）skill were observed.Results①Blood lymphocyte expression levels：the Th cells，Ts cells express terms in group A and group B was significantly lower than that of group C，in terms of expressing B cells was higher than that of group C，the difference was statistically significant（P＜0.05）.②The expression level of serum inflammatory mediators：the expression levels of TNF-α，IL-6，IL-10 in group A and group B was significantly higher than that of group C respectively，and group B was significantly higher than that of group A（P＜0.05）.③The level of serum immunoglobulin and complement levels：the level of IgA，IgG in group A and group B was higher than that in group C，and group B was significantly higher than that of group A（P＜0.05）.The difference of the terms IgM among the three groups was not statistically significant.The levels of C3，C4 in group A and group B was significantly higher than that of group C，and group B was significantly higher than that in group A（P＜0.05）.Conclusion EV71 hand-foot-mouth disease infection child presenting cell and humoral immune function abnormalities，and have some correlation with children′condition to detect serum markers associated help improve the quality of clinical prognosis.
［Key words］EV71 virus；Hand-foot-mouth disease；Cellular immunity；Humoral immunity
［中图分类号］R725.1［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）06（b）-0008-03
［基金项目］广东省东莞市科学技术局社会科技发展项目（2013 108101017）（收稿日期：2016-02-02 本文编辑：王红双）