sCD40L在子痫前期孕妇中的动态表达及其意义
曾月娥 陈国庆 王 忠 王晨虹
深圳市妇幼保健院产科，深圳 518028
深圳市妇幼保健院产科，深圳 518028
［摘要］目的探讨sCD40L在子痫前期孕妇中的动态表达及其意义。方法选取2014年6月～2015年6月在本院行产检诊断的42例早发型子痫前期孕妇作为实验组，选取同期的50例正常孕妇作为对照组。采集两组孕20、24、28周时的外周血，应用酶联兔疫吸附试验对血清sCD40L表达量进行检测，比较两组的sCD40L表达水平。 结果实验组孕20、24、28周的血清sCD40L表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。对照组的血清sCD40L表达水平较低，孕20、24、28周表达量无明显变化。随着孕周的增加，实验组的sCD40L血清表达量逐步上升，孕24周明显高于孕20周（F=33.41，P＜0.01），孕28周明显高于孕24周（F=27.38，P＜0.01）。 结论sCD40L作为子痫前期早期预警指标及病情监测指标具有良好的临床前景。
［关键词］sCD40L；子痫前期；酶联免疫吸附试验；跨膜蛋白
子痫前期（preec1ampsia）是发生于妊娠20周后患者血压升高伴随尿蛋白异常出现的孕产妇高血压疾病，严重时危及母婴生命安全［1-2］。目前，其发病原因尚未完全明确，炎症反应学说被认为是子痫前期发病的重要因素之一［3］。近年来的研究［4］显示，作为炎症因子肿瘤坏死因子家族中的重要成员，白细胞分化抗原配体CD40L在原发性高血压、动脉粥样硬化等疾病炎症机制中发挥着关键作用，CD40L以膜结合型及游离型两种形式存在于体内，前者表现为跨膜糖蛋白，主要表达于兔疫细胞如CD4淋巴细胞、血小板细胞膜表面；后者以游离状态存在于患者血液、组织液中。CD40L与CD40结合后可激活多条炎症信号转导通路，对血小板介导的链式炎症反应发挥着重要的控制作用［5］。已有研究［6］证实，sCD40L在早发型子痫前期孕妇血清中的表达量升高，升高程度与疾病严重程度相关，但针对同一孕妇妊娠中期与妊娠晚期sCD40L的动态表达情况目前未见报道，因而难以确定此蛋白与子痫前期病情进展的关系。本研究采取跟踪研究方法，对同一实验对象不同妊娠阶段的sCD40L进行检测，揭示sCD40L在初期、中期、后期子痫前期孕妇中的动态表达规律，以期为尽早发现、预测子痫前期及其进展，提前采取干预措施防治本病提供新的预测性实验室指标。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2014年6月～2015年6月深圳市妇幼保健院产科门诊行产检诊断的42例早发型子痫前期孕妇作为实验组，均为单胎妊娠，年龄20～34岁，平均（27.46±4.13）岁。诊断标准依照全国医药院校第8版《妇产科学》教材，即妊娠20周后出现收缩压≥140 mmHg和（或）舒张压≥90 mmHg，伴随蛋白尿≥0.3 g/24 h，或随机尿蛋白≥+。同时随机选取本院门诊的50例正常孕妇作为对照组，均为单胎妊娠，年龄20～34岁，平均（24.36±3.96）岁。所有孕妇均无内外科合并症，妊娠前无高血压、心脏病、脑血管病、肾病史及家族史，无吸烟、毒品吸入史，未发现先兆流产、胎盘异常等妇产科并发症，妊娠期无急性、慢性传染病史，且均为第1次妊娠。
1.2 主要仪器与材料
酶联兔疫检测仪为美国Bio-Rad公司产品；W-MK2洗板机购自美国Thermo Scientifi公司；高速离心机为Eppendorf公司产品；DZF-602电热恒温箱为广州市康恒仪器有限公司产品；sCD40L试剂盒购自上海生工生物公司。
1.3 实验方法
所选孕妇于孕20、24、28周空腹12 h后采取肘静脉血5 m1，置于高速离心机内离心，分离血清，将血清转移至EP管内，存入-70℃冷冻保存以备后续实验，待所有标准收集成功后，于半年内行sCD40L检测。严格按照sCD40L检测说明书进行检测，分别将各孕妇血清加入酶联兔疫检测小孔内，经过抗原抗体反应、洗板、显色等步骤，最终显色后置入酶标仪中读取OD值，并计算sCD40L相对表达量。
1.4 统计学处理
采用SAS 9.0简体中文版软件对数据进行分析，计量资料以.jpg)
±s表示，首先对数据进行初步统计分析，判别数据是否为正态性分布，对呈现正态分布的数据进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
±s表示，首先对数据进行初步统计分析，判别数据是否为正态性分布，对呈现正态分布的数据进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 两组不同孕周血清sCD40L表达水平的比较
对照组的血清sCD40L表达水平较低，孕20、24、28周表达量无明显变化。实验组孕20、24、28周的血清sCD40L表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）（表1）。
表1 两组不同孕周血清sCD40L表达水平的比较（μg/L，.jpg)
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2.2 两组不同孕周血清sCD40L的表达趋势分析
随着孕周的增加，实验组的sCD40L血清表达量逐步上升，孕24周明显高于孕20周（F=33.41，P＜0.01），孕28周明显高于孕24周（F=27.38，P＜0.01）（图1）。
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图1 对照组与实验组不同孕周血清sCD40L表达趋势图
3 讨论
由于全身小动脉压力增高使得胎盘组织供血不足，常致胎儿宫内生长滞慢。妊娠晚期随着胎儿体质量的增加，其物质代谢需求也相应增加，而胎盘供血不足可诱发慢性胎儿宫内窘迫，严重时导致胎儿宫内死亡。与此同时，小血管压力增高可使母体脑部缺血、缺氧并诱发脑血管意外、子痫等严重并发症［7-9］。早期发现、早期干预是防治子痫前期的重要临床策略，但是目前针对子痫前期仍然缺乏有效的、敏感的指标。
最近的研究显示，CD40是重要的炎症因子，而sCD40L是其表达产物的游离形式，当CD40与其本体CD40L结合后，可介导CD40/CD40L信号传导系统的激活，进而激活一系列的靶基因表达，最终诱发炎症细胞活化，产生炎症效应。人CD40基因定位于20号染色体q11-q13.2，CD40L基因则位于X染色体26.227.1，前者表达277个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，后者表达261个氨基酸组成的Ⅱ型跨膜蛋白，两者组成CD40/CD40L信号传导系统，该系统最终效应是促进炎症因子的表达以及参与炎症相关酶类的表达［10-11］。生理条件下，CD40/CD40L表达后，可存在于血小板中，在病理状态或血小板被活化后CD40被激活，生成游离状态的sCD40，后者活性极强，能够激发炎症反应并可损伤血管内皮细胞。
本研究通过对子痫前期不同孕周的外周血进行检测，结果显示，随着孕周的增长，sCD40表达量明显上升，差异有统计学意义，而在正常对照组中，其表达量极低，且未随孕周的增加而增高，提示sCD40与子痫前期发病具有密切关系，同时也可作为敏感指标用于早期诊断或预警，从而丰富了临床对子痫前期的实验室诊断指标。有研究［12-14］显示，sCD40/sCD40L信号系统激活后，可介导AS和ACS在微血管内形成血栓，并损伤血管内皮细胞，刺激血管平滑肌细胞增生，使血管壁增厚，同时还可激活上述细胞，启动细胞内分泌功能并分泌一系列炎症因子，如白细胞介素1、肿瘤坏死因子等强效炎症因子，并可使组织因子生成增加，进一步诱发血栓形成。子痫前期是以高血压为基础的血管损伤性疾病，在发病初期可见血管内皮细胞损伤，最终可导致胎心监护无反应型，出现胎儿窘迫等并发症［15］。因此可推测，子痫前期孕妇的sCD40L表达量增高，当其与配体结合后可激活信号传导系统，并在广泛的微血管内损伤内皮细胞，导致微血栓形成，特别是胎盘部位的血管内皮细胞，受损后可导致胎盘着床达不到应有的深度，并影响血管螺旋结构的形成，使滋养细胞供血减少，影响滋养细胞功能，进而使滋养细胞增殖、侵袭功能减弱，这也是胎盘着床障碍的另一大重要因素。胎盘形成受抑最终可导致胎儿宫内慢性缺氧，并诱导一系列子痫前期症状出现，但是上述推测仍有待进一步验证。目前，sCD40L与子痫前期发病机制的研究报道甚少，但在其他血管性疾病中的研究已有较为肯定的结论，如在动脉粥样硬化症中，sCD40L表达量升高，其可促使血管组织细胞中的活性氧簇（ROS）产生，诱发以血小板聚集为基础的斑块形成，并可激活炎症细胞，产生包括白细胞介素、肿瘤坏死因子在内的一系列炎症因素，促进局部血栓形成，损伤内皮细胞，进而导致并发症的出现。
本研究结果显示，在子痫前期孕妇中，随着孕周的增长，sCD40L表达量呈线性增高，并明显高于正常孕妇，而线性升高现象在正常孕妇中不存在，提示sCD40L与子痫前期发病存在一定关系，将其作为子痫前期早期预警指标及病情监测指标具有重要的临床意义，然而要将这一指标在临床上广泛推广，仍有待大样本、多中心、随机双盲的研究。
综上所述，sCD40L作为子痫前期早期预警指标及病情监测指标具有良好的临床前景。
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Dynamic expression and significance of sCD40L in pregnant women with preeclampsia
ZENG Yue-e CHEN Guo-qing WANG Zhong WANG Chen-hong
Department of Obstetrics，Maternity and Chi1d Hea1th Care Hospita1 of Shenzhen City，Shenzhen 518028，China
Department of Obstetrics，Maternity and Chi1d Hea1th Care Hospita1 of Shenzhen City，Shenzhen 518028，China
[Abstract]Objective To exp1ore dynamic expression and significance of sCD40L in pregnant women with preec1ampsia.Methods 42 cases of ear1y onset preec1ampsia pregnant women in our hospita1 from June 2014 to June 2015 were se1ected as the experimenta1 group，50 norma1 pregnant women were se1ected as the contro1 group at the same period. Periphera1 b1ood of pregnant women in the two groups was co11ected in 20，24，28 weeks of pregnancy，then expression 1eve1 of serum sCD40L were detected by enzyme-1inked immunosorbent assay，the expression 1eve1 of sCD40L in the two groups was compared.Results The expression 1eve1 of serum sCD40L in 20，24，28 weeks of pregnancy in the experimenta1 group was higher than that in the contro1 group，with significant difference （P＜0.01）.The expression 1eve1 of sCD40L in the contro1 group was 1ower，there was no significant change of the expression 1eve1 in 20，24 and 28 weeks of pregnancy.The expression 1eve1 of sCD40L in the experimenta1 group increased gradua11y with the increase of pregnancy weeks，the expression 1eve1 of sCD40L in 24 weeks of pregnancy was higher than that in 20 weeks of pregnancy （F= 33.41，P＜0.01），the expression 1eve1 of sCD40L in 28 weeks of pregnancy was higher than that in 24 weeks of pregnancy （F=27.38，P＜0.01）.Conclusion As ear1y warning indicators and disease monitoring indicators of preec1ampsia，sCD40L has a good c1inica1 prospect.
[Key words]sCD40L；Preec1ampsia；Enzyme-1inked immunosorbent assay；Transmembrane protein
［中图分类号］R714.24+4［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）05（b）-0072-03
［基金项目］广东省深圳市科技计划医疗卫生类项目（2013 02111）
（收稿日期：2016-03-19本文编辑：祁海文）